| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-33页 |
| 1.1 DNA甲基化 | 第9-27页 |
| 1.1.1 哺乳动物基因组中DNA甲基化的分布 | 第9-13页 |
| 1.1.2 哺乳动物基因组中DNA甲基化的建立与维持 | 第13-18页 |
| 1.1.3 哺乳动物基因组中DNA甲基化的去除 | 第18-21页 |
| 1.1.4 哺乳动物基因组中DNA甲基化修饰的功能 | 第21-27页 |
| 1.2 维持性DNA甲基转移酶DNMT1的调控 | 第27-33页 |
| 1.2.1 DNMT1蛋白简介 | 第27-28页 |
| 1.2.2 DNMT1被招募至复制叉位点的机制 | 第28-31页 |
| 1.2.3 DNMT1蛋白招募至复制叉位点还存在的科学问题 | 第31-33页 |
| 第二章 实验材料与实验方法 | 第33-53页 |
| 2.1 实验材料 | 第33-41页 |
| 2.1.1 实验用质粒及空载 | 第33-34页 |
| 2.1.2 克隆引物 | 第34-38页 |
| 2.1.3 实验用细胞及感受态 | 第38页 |
| 2.1.4 本论文所用到的抗体 | 第38页 |
| 2.1.5 一些常用试剂及试剂盒 | 第38-41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-53页 |
| 2.2.1 质粒构建 | 第41-46页 |
| 2.2.2 细胞培养及细胞转染 | 第46-47页 |
| 2.2.3 Westernblot | 第47-48页 |
| 2.2.4 免疫沉淀 | 第48-49页 |
| 2.2.5 免疫共沉淀 | 第49页 |
| 2.2.6 Pull-downassay | 第49-50页 |
| 2.2.7 从大肠杆菌中纯化蛋白 | 第50-51页 |
| 2.2.8 免疫染色 | 第51页 |
| 2.2.9 基因组甲基化免疫染色 | 第51-52页 |
| 2.2.10 细胞S期同步化 | 第52页 |
| 2.2.11 抽提组蛋白 | 第52-53页 |
| 第三章 实验结果 | 第53-68页 |
| 3.1 引言 | 第53-54页 |
| 3.2 实验结果 | 第54-68页 |
| 3.2.1 构建HA-tag泛素融合蛋白 | 第54-55页 |
| 3.2.2 与泛素融合后蛋白定位不发生改变 | 第55-56页 |
| 3.2.3 免疫共沉淀及pull-down实验检测HA-tag泛素融合蛋白与DNMT1的互作 | 第56-58页 |
| 3.2.4 构建FLAG-tag泛素融合蛋白 | 第58-59页 |
| 3.2.5 与泛素融合后同DNMT1相互作用没有增强 | 第59-60页 |
| 3.2.6 FLAG-tag泛素融合蛋白在UHRF1敲除的ESC细胞中不能回复DNA甲基化 | 第60-61页 |
| 3.2.7 构建含LinkerFLAG-tag泛素融合蛋白 | 第61-62页 |
| 3.2.8 含LinkerFLAG-tag泛素融合蛋白与DNMT1结合相对蛋白本身没有增强 | 第62-63页 |
| 3.2.9 含LinkerFLAG-tag泛素融合蛋白在UHRF1敲除的ESC细胞中DNA甲基化回复实验 | 第63-64页 |
| 3.2.10 DNMT1选择性结合体内催化的泛素化修饰的H3不结合H3与泛素融合蛋白 | 第64-67页 |
| 3.2.11 UB-H3融合蛋白在UHRF1KOESC中不能回复DNA甲基化 | 第67-68页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第68-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 缩略语 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第83页 |
