摘要 | 第6-8页 |
ABSTRACT | 第8-9页 |
第一章 文献综述 | 第14-35页 |
1.1. HEDGEHOG(HH)信号通路 | 第14-26页 |
1.1.1. 概述 | 第14-15页 |
1.1.2. Hh 信号通路的传导途径(图 1‐1) | 第15-18页 |
1.1.3. Hh 信号通路的主要功能 | 第18-20页 |
1.1.4. Hh 信号通路与其它信号或因子的关系 | 第20-25页 |
1.1.5. Hh 信号通路的调节物 | 第25-26页 |
1.2. 肌肉卫星细胞 | 第26-32页 |
1.2.1. 肌肉的发育规律 | 第26-27页 |
1.2.2. 肌肉卫星细胞的地位和作用 | 第27-29页 |
1.2.3. 肌肉卫星细胞相关的信号因子和基因调节 | 第29-31页 |
1.2.4. 肌肉卫星细胞与肉牛生产 | 第31-32页 |
1.3. HH 信号通路对细胞增殖及分化的调控研究 | 第32-34页 |
1.3.1. Hh 信号通路与细胞增殖 | 第32-33页 |
1.3.2. Hh 信号通路与中胚层来源的细胞的分化 | 第33-34页 |
1.4. 本研究的目的和意义 | 第34-35页 |
第二章 HH 信号通路成员在牛不同组织的特异性表达分析 | 第35-41页 |
2.1. 材料与方法 | 第35-36页 |
2.1.1. 样品采集 | 第35页 |
2.1.2. 组织中总 RNA 提取 | 第35页 |
2.1.3. 反转录 PCR | 第35页 |
2.1.4. 荧光实时定量 PCR | 第35页 |
2.1.5. 数据统计及分析 | 第35-36页 |
2.2. 结果分析 | 第36-38页 |
2.2.1. Ptch1 基因在牛各组织中的表达情况 | 第36页 |
2.2.2. Smo 基因在牛各组织中的表达情况 | 第36-37页 |
2.2.3. Gli1 基因在牛各组织中的表达情况 | 第37-38页 |
2.2.4. Gli2 基因在牛各组织中的表达情况 | 第38页 |
2.3. 讨论 | 第38-40页 |
2.4. 小结 | 第40-41页 |
第三章 牛肌肉卫星细胞的分离培养及鉴定 | 第41-49页 |
3.1. 材料与方法 | 第41-42页 |
3.1.1. 牛 MuSC 的原代分离及培养 | 第41页 |
3.1.2. 细胞免疫荧光鉴定 | 第41-42页 |
3.1.3. 细胞中总 RNA 的提取 | 第42页 |
3.1.4. 反转录 PCR | 第42页 |
3.1.5. 荧光实时定量 PCR | 第42页 |
3.1.6. 数据统计及分析 | 第42页 |
3.2. 结果分析 | 第42-46页 |
3.2.1. 根据贴壁能力分离出不同的细胞类群 | 第42-43页 |
3.2.2. 免疫细胞化学鉴定结果 | 第43-44页 |
3.2.3. Hh 通路成员在牛肌肉来源的不同细胞类群中的表达情况 | 第44-46页 |
3.3. 讨论 | 第46-48页 |
3.3.1 肌肉组织原代细胞的分离和鉴定 | 第46-47页 |
3.3.2 各细胞类群中 Hh 信号通路成员的表达情况 | 第47-48页 |
3.4. 小结 | 第48-49页 |
第四章 HH 信号通路对牛肌肉卫星细胞增殖的影响 | 第49-55页 |
4.1. 材料与方法 | 第49-50页 |
4.1.1. 生长曲线的绘制 | 第49页 |
4.1.2. 细胞周期的检测 | 第49页 |
4.1.3. 细胞中总 RNA 的提取 | 第49-50页 |
4.1.4. 反转录 PCR | 第50页 |
4.1.5. 荧光实时定量 PCR | 第50页 |
4.1.6. 数据统计及分析 | 第50页 |
4.2. 结果分析 | 第50-52页 |
4.2.1. Cyclopamine 浓度对生长曲线的影响 | 第50-51页 |
4.2.2. 细胞周期的流式检测结果 | 第51页 |
4.2.3. 细胞周期蛋白的基因表达情况 | 第51-52页 |
4.3. 讨论 | 第52-54页 |
4.4. 小结 | 第54-55页 |
第五章 HH 信号通路对牛肌肉卫星细胞成肌分化的作用研究 | 第55-71页 |
5.1. 材料与方法 | 第55页 |
5.1.1. 牛 MuSC 的成肌分化 | 第55页 |
5.1.2. 细胞中总 RNA 的提取 | 第55页 |
5.1.3. 反转录 PCR | 第55页 |
5.1.4. 荧光实时定量 PCR | 第55页 |
5.1.5. 数据统计及分析 | 第55页 |
5.2. 结果分析 | 第55-65页 |
5.2.1. 不同浓度 cyclopamine 对牛 MuSC 成肌分化的影响 | 第55-60页 |
5.2.2. Hh 信号通路激动剂 purmorphamine 牛肌肉卫星细胞成肌分化的影响 | 第60-65页 |
5.3. 讨论 | 第65-70页 |
5.3.1. 在成肌分化过程中 Hh 信号通路的变化情况 | 第65-66页 |
5.3.2. 肌肉细胞成肌分化的发生 | 第66-67页 |
5.3.3. 成肌分化过程中相关因子的基因表达 | 第67-70页 |
5.4. 小结 | 第70-71页 |
第六章 HH 信号通路对牛肌肉卫星细胞成脂分化的作用研究 | 第71-86页 |
6.1. 材料与方法 | 第71-72页 |
6.1.1. 通过过表达诱导牛 MuSC 的成脂分化 | 第71页 |
6.1.2. 含胰岛素的诱导液诱导牛 MuSC 的成脂分化 | 第71页 |
6.1.3. 细胞中总 RNA 的提取 | 第71页 |
6.1.4. 反转录 PCR | 第71页 |
6.1.5. 荧光实时定量 PCR | 第71页 |
6.1.6. 数据统计及分析 | 第71-72页 |
6.2. 结果分析 | 第72-82页 |
6.2.1. 过表达 C/EBPα诱导牛 MuSC 成脂分化过程中 Hh 信号通路组分的表达情况 | 第72-73页 |
6.2.2. 过表达 ADIG 诱导牛 MuSC 成脂分化过程中 Hh 信号通路组分的表达情况 | 第73-76页 |
6.2.3. 不同浓度 Cyclopamine 对牛肌肉卫星细胞成脂分化的影响 | 第76-80页 |
6.2.4. Hh 信号通路激动剂 Purmorphamine 牛肌肉卫星细胞成脂分化的影响 | 第80-82页 |
6.3. 讨论 | 第82-85页 |
6.3.1. 牛 MuSC 成脂过程中 Hh 信号通路的变化情况 | 第82-83页 |
6.3.2. 成脂过程中相关因子的作用关系 | 第83-84页 |
6.3.3. Hh 信号对于牛 MuSC 成脂的影响 | 第84-85页 |
6.4. 小结 | 第85-86页 |
第七章 结论及创新点 | 第86-87页 |
(一)结论 | 第86页 |
(二)创新点 | 第86-87页 |
参考文献 | 第87-109页 |
附录 | 第109-115页 |
一、所用到的主要仪器设备 | 第109页 |
二、所用到的主要试剂及耗材 | 第109-110页 |
三、总 RNA 的提取 | 第110-112页 |
四、反转录 PCR | 第112页 |
五、荧光实时定量 PCR | 第112-115页 |
缩略词 | 第115-116页 |
致谢 | 第116-117页 |
作者简介 | 第117页 |