| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 符号说明 | 第13-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-27页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征 | 第15-16页 |
| 1.2 PRRSV病原学特点 | 第16页 |
| 1.2.1 PRRSV的分类 | 第16页 |
| 1.2.2 PRRSV理化特性和生物学特性 | 第16页 |
| 1.3 PRRS的流行病学 | 第16-18页 |
| 1.3.1 PRRSV的传播 | 第16-17页 |
| 1.3.2 PRRS的国内流行情况 | 第17-18页 |
| 1.4 PRRSV的分子生物学研究 | 第18-23页 |
| 1.4.1 PRRSV的基因组结构与功能 | 第18-19页 |
| 1.4.2 PRRSV编码的非结构蛋白与功能 | 第19-20页 |
| 1.4.3 PRRSV编码的结构蛋白与功能 | 第20-21页 |
| 1.4.4 PRRSV遗传变异及重组机制 | 第21-23页 |
| 1.4.4.1 PRRSV遗传变异 | 第21-22页 |
| 1.4.4.2 PRRSV重组 | 第22-23页 |
| 1.5 PRRS诊断方法 | 第23-27页 |
| 1.5.1 病毒分离鉴定 | 第24页 |
| 1.5.2 血清学诊断方法 | 第24-25页 |
| 1.5.3 分子生物学诊断方法 | 第25-27页 |
| 第2章 2014-2017年山东省猪繁殖与呼吸综合征病毒感染情况调查 | 第27-36页 |
| 2.1 材料与方法 | 第27-29页 |
| 2.1.1 病料采集 | 第27-28页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第28页 |
| 2.1.3 引物设计 | 第28页 |
| 2.1.4 主要实验器材 | 第28-29页 |
| 2.1.5 实验试剂配制 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-32页 |
| 2.2.1 病料处理 | 第29页 |
| 2.2.2 总RNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.3 cDNA第一链的合成 | 第30页 |
| 2.2.4 PRRSV的PCR检测 | 第30页 |
| 2.2.5 目的片段的回收与纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.6 Nsp2和ORF7基因的克隆及测序 | 第31页 |
| 2.2.7 ORF7遗传演化分析 | 第31-32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-35页 |
| 2.3.1 RT-PCR检测结果及山东不同地区PRRSV感染情况调查 | 第32-33页 |
| 2.3.2 山东地区PRRSV不同毒株流行动态变化 | 第33-34页 |
| 2.3.3 PRRSV ORF7基因遗传进化分析 | 第34-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35页 |
| 2.5 小结 | 第35-36页 |
| 第3章 3株PRRSV新变异毒株的分离与鉴定 | 第36-43页 |
| 3.1 材料和方法 | 第36-38页 |
| 3.1.1 病料、毒株、细胞及抗体 | 第36页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第36页 |
| 3.1.3 细胞培养与病毒扩增 | 第36-37页 |
| 3.1.3.1 Marc-145细胞培养 | 第36-37页 |
| 3.1.3.2 病毒扩增 | 第37页 |
| 3.1.4 病毒总RNA提取及目的基因扩增 | 第37页 |
| 3.1.4.1 Trizol法提取病毒总RNA | 第37页 |
| 3.1.4.2 RT-PCR检测 | 第37页 |
| 3.1.5 间接免疫荧光试验(IFA) | 第37-38页 |
| 3.1.6 TCID_(50)测定 | 第38页 |
| 3.2 结果与分析 | 第38-42页 |
| 3.2.1 病原分离 | 第38-39页 |
| 3.2.2 RT-PCR检测 | 第39页 |
| 3.2.3 IFA检测 | 第39-40页 |
| 3.2.4 TCID_(50)测定 | 第40-42页 |
| 3.3 讨论 | 第42页 |
| 3.4 小结 | 第42-43页 |
| 第4章 3株PRRSV新变异毒株的全基因组序列测定与重组与演化分析 | 第43-63页 |
| 4.1 材料和方法 | 第43-46页 |
| 4.1.1 毒株、菌株及载体 | 第43页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 4.1.3 引物设计与合成 | 第43-44页 |
| 4.1.4 RNA提取与PCR扩增、克隆测序 | 第44页 |
| 4.1.5 NSP2氨基酸序列比对,二级结构和三维结构预测 | 第44-45页 |
| 4.1.6 全基因组序列组装及同源性分析 | 第45页 |
| 4.1.7 重组分析 | 第45页 |
| 4.1.8 PRRSV的遗传演化分析 | 第45-46页 |
| 4.2 结果与分析 | 第46-60页 |
| 4.2.1 3个变异毒株的全基因组特征分析 | 第46-47页 |
| 4.2.2 NSP2氨基酸序列、二级结构及3D结构预测分析 | 第47-52页 |
| 4.2.3 SDhz1512、SDlz1601、和SDYG1606变异株的重组分析 | 第52-53页 |
| 4.2.4 PRRSV遗传演化分析 | 第53-60页 |
| 4.3 讨论 | 第60-62页 |
| 4.4 小结 | 第62-63页 |
| 第5章 TaqMan多重实时荧光PCR检测方法的建立与应用 | 第63-74页 |
| 5.1 材料与方法 | 第64页 |
| 5.1.1 供试材料 | 第64页 |
| 5.1.2 试剂与仪器 | 第64页 |
| 5.2 方法 | 第64-67页 |
| 5.2.1 引物与TaqMan探针的设计 | 第64-65页 |
| 5.2.2 样品DNA的提取 | 第65页 |
| 5.2.3 阳性重组质粒的构建 | 第65页 |
| 5.2.4 单重TaqMan荧光PCR检测方法的建立 | 第65-66页 |
| 5.2.5 多重TaqMan荧光PCR检测方法的建立 | 第66页 |
| 5.2.6 多重TaqMan荧光定量PCR标准曲线的制作 | 第66页 |
| 5.2.7 多重TaqMan实时荧光PCR特异性试验 | 第66页 |
| 5.2.8 多重TaqMan实时荧光PCR灵敏度试验 | 第66页 |
| 5.2.9 多重TaqMan实时荧光PCR的应用 | 第66-67页 |
| 5.3 结果与分析 | 第67-72页 |
| 5.3.1 单重TaqMan荧光PCR检测方法的建立 | 第67-68页 |
| 5.3.2 多重TaqMan荧光PCR检测方法的建立 | 第68-69页 |
| 5.3.3 多重TaqMan荧光定量PCR标准曲线的制作 | 第69-70页 |
| 5.3.4 多重TaqMan荧光PCR特异性试验 | 第70-71页 |
| 5.3.5 多重TaqMan荧光PCR灵敏度试验 | 第71页 |
| 5.3.6 临床样本检测 | 第71-72页 |
| 5.4 讨论 | 第72-73页 |
| 5.5 小结 | 第73-74页 |
| 全文总结 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 硕士期间发表论文及申请专利 | 第84-85页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第85页 |
