| 符号说明 | 第4-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-27页 |
| 1.1 鸭病毒性肝炎的概述 | 第14-17页 |
| 1.1.1 鸭肝炎病毒的发现及分类 | 第14-15页 |
| 1.1.2 DHAV的形态学结构和理化特性 | 第15-16页 |
| 1.1.3 DHAV培养特性 | 第16页 |
| 1.1.4 DHAV的分子生物学研究 | 第16-17页 |
| 1.2 鸭病毒性肝炎的流行病学 | 第17-18页 |
| 1.2.1 发生与分布 | 第17-18页 |
| 1.2.2 病毒的宿主 | 第18页 |
| 1.2.3 病毒的传播途径 | 第18页 |
| 1.3 鸭肝炎病毒的临床症状和病理变化 | 第18-19页 |
| 1.4 鸭肝炎病毒的预防和治疗 | 第19-22页 |
| 1.4.1 灭活疫苗 | 第20页 |
| 1.4.2 弱毒疫苗 | 第20-21页 |
| 1.4.3 基因工程疫苗 | 第21-22页 |
| 1.5 乳酸菌及其表达系统的研究现状 | 第22-25页 |
| 1.5.1 乳酸菌的概述 | 第22-23页 |
| 1.5.2 乳酸菌表达系统 | 第23-24页 |
| 1.5.2.1 组成型表达系统 | 第23页 |
| 1.5.2.2 诱导型表达系统 | 第23-24页 |
| 1.5.3 食品级表达系统 | 第24-25页 |
| 1.6 黏膜免疫的研究进展 | 第25-26页 |
| 1.7 本研究的目的及意义 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-42页 |
| 2.1 材料 | 第27-30页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第27页 |
| 2.1.2 主要试剂与试剂盒 | 第27页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第27页 |
| 2.1.4 实验所用溶液及其配制 | 第27-30页 |
| 2.1.4.1 LB培养基、GM17培养基和Elliker培养基 | 第27-28页 |
| 2.1.4.2 乳酸乳球菌感受态制备所需试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.4.3 SDS-PAGE及WesternBlot试剂的配制 | 第29-30页 |
| 2.1.4.4 蛋白纯化所用溶液 | 第30页 |
| 2.2 3型鸭甲肝病毒VP1基因重组乳酸乳球菌的构建 | 第30-37页 |
| 2.2.1 重组乳酸乳球菌VP1基因在大肠杆菌表达载体中的构建及诱导表达和纯化 | 第30-36页 |
| 2.2.1.1 提取3型鸭甲肝SD1101株VP1全基因和乳酸乳球菌pNZ8149质粒 | 第30-31页 |
| 2.2.1.2 PCR引物的设计和合成 | 第31-32页 |
| 2.2.1.3 PCR扩增目的基因 | 第32-33页 |
| 2.2.1.4 PCR产物的回收与纯化 | 第33页 |
| 2.2.1.5 DH5α感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| 2.2.1.6 融合PCR产物与克隆载体的连接及转化 | 第34页 |
| 2.2.1.7 重组质粒DNA的提取 | 第34页 |
| 2.2.1.8 重组质粒的酶切鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.1.9 VP1蛋白在原核表达系统中的诱导表达 | 第35页 |
| 2.2.1.10 VP1蛋白在原核表达系统中的纯化 | 第35-36页 |
| 2.2.2 表达VP1基因重组乳酸乳球菌的构建 | 第36-37页 |
| 2.2.2.1 克隆载体的单酶切及回收 | 第36页 |
| 2.2.2.2 乳酸乳球菌NZ3900感受态的制备 | 第36-37页 |
| 2.2.2.3 克隆载体的自身连接 | 第37页 |
| 2.2.2.4 电转化入乳酸乳球菌NZ | 第37页 |
| 2.2.2.5 pNZ8149-VP1/NZ3900重组质粒的酶切鉴定 | 第37页 |
| 2.3 VP1基因在重组乳酸乳球菌中的表达 | 第37-39页 |
| 2.3.1 重组乳酸乳球菌VP1基因的诱导表达 | 第37-38页 |
| 2.3.2 表达产物的Westernblot检测分析 | 第38-39页 |
| 2.4 表达VP1蛋白的重组乳酸乳球菌口服免疫研究 | 第39-42页 |
| 2.4.1 口服免疫 | 第39页 |
| 2.4.1.1 菌株的活化及菌液的制备 | 第39页 |
| 2.4.1.2 BALB/C小鼠的免疫试验 | 第39页 |
| 2.4.2 血清IgG和肠粘膜sIgA的测定 | 第39-40页 |
| 2.4.3 血清IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10浓度的检测 | 第40-41页 |
| 2.4.4 MTT法淋巴细胞转化率(LTR)检测 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-49页 |
| 3.1 VP1基因在大肠杆菌表达载体中的构建及表达条件的优化 | 第42-44页 |
| 3.1.1 VP1基因和pNZ8149载体的PCR扩增 | 第42-43页 |
| 3.1.2 重组乳酸乳球菌VP1基因的克隆与鉴定 | 第43-44页 |
| 3.1.3 VP1基因在大肠杆菌中表达条件的优化 | 第44页 |
| 3.1.4 VP1基因在大肠杆菌中纯化结果… | 第44页 |
| 3.2 表达VP1基因重组乳酸乳球菌的构建 | 第44-46页 |
| 3.2.1 VP1基因乳酸乳球菌表达载体的电转化结果 | 第44-45页 |
| 3.2.2 VP1基因乳酸乳球菌表达载体的鉴定结果 | 第45-46页 |
| 3.3 VP1基因在重组乳酸乳球菌中的表达 | 第46页 |
| 3.4 血清IgG和肠粘膜sIgA抗体水平的测定结果 | 第46-47页 |
| 3.5 血清IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10浓度的检测结果 | 第47-48页 |
| 3.6 淋巴细胞增殖反应试验结果 | 第48-49页 |
| 讨论 | 第49-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第61页 |
