| 摘要 | 第11-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-23页 |
| 1.1 芍药概述 | 第14页 |
| 1.2 芍药种子休眠的原因 | 第14-16页 |
| 1.2.1 种皮的机械阻碍 | 第15页 |
| 1.2.2 内源抑制物质 | 第15-16页 |
| 1.3 脱落酸(ABA)在植物种子休眠过程中的作用 | 第16-17页 |
| 1.4 蛋白磷酸酶PP2C的研究进展 | 第17-20页 |
| 1.4.1 蛋白磷酸酶PP2C家族组成 | 第17-18页 |
| 1.4.2 PP2C负调控ABA信号转导途径 | 第18-20页 |
| 1.5 遗传转化 | 第20-21页 |
| 1.5.1 植物的遗传转化 | 第20页 |
| 1.5.2 农杆菌介导的遗传转化 | 第20-21页 |
| 1.6 本研究的目的意义与技术路线 | 第21-23页 |
| 1.6.1 本研究的目的意义 | 第21页 |
| 1.6.2 本研究的内容与技术路线 | 第21-23页 |
| 第二章 芍药PlPP2C基因的克隆及序列分析 | 第23-39页 |
| 2.1 试验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 菌株和试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 溶液的配制 | 第23页 |
| 2.1.4 试验仪器与耗材 | 第23-24页 |
| 2.1.5 引物设计及合成 | 第24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-29页 |
| 2.2.1 芍药种子总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.2 反转录合成第一链cDNA | 第25-26页 |
| 2.2.3 PCR反应 | 第26页 |
| 2.2.4 PCR产物的切胶回收 | 第26-27页 |
| 2.2.5 克隆载体与目的片段连接 | 第27页 |
| 2.2.6 转化大肠杆菌菌株 | 第27-28页 |
| 2.2.7 筛选阳性克隆 | 第28页 |
| 2.2.8 菌体PCR鉴定 | 第28页 |
| 2.2.9 生物信息学分析 | 第28-29页 |
| 2.3 结果与分析 | 第29-37页 |
| 2.3.1 提取芍药种子总RNA | 第29页 |
| 2.3.2 反转录合成cDNA的检测 | 第29-30页 |
| 2.3.3 芍药PlPP2C基因的获取 | 第30页 |
| 2.3.4 菌体PCR检测结果 | 第30-31页 |
| 2.3.5 PlPP2C基因生物信息学分析 | 第31-37页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第37-39页 |
| 2.4.1 小结 | 第37页 |
| 2.4.2 讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 PlPP2C基因的表达分析与表达载体的构建 | 第39-46页 |
| 3.1 试验材料 | 第39页 |
| 3.1.1 菌株及载体 | 第39页 |
| 3.1.2 试验试剂 | 第39页 |
| 3.1.3 溶液及培养基的配制 | 第39页 |
| 3.1.4 试验仪器 | 第39页 |
| 3.2 试验方法 | 第39-43页 |
| 3.2.1 设计引物 | 第39-40页 |
| 3.2.2 实时荧光定量RT-PCR检测 | 第40页 |
| 3.2.3 扩增目的片段 | 第40-41页 |
| 3.2.4 扩增产物的回收及与克隆载体的连接 | 第41页 |
| 3.2.5 质粒的提取 | 第41-42页 |
| 3.2.6 对质粒进行双酶切 | 第42页 |
| 3.2.7 目的片段与表达载体连接及转化 | 第42-43页 |
| 3.3 结果与分析 | 第43-44页 |
| 3.3.1 PlPP2C基因在不同时期的表达分析 | 第43页 |
| 3.3.2 目的片段克隆 | 第43-44页 |
| 3.3.3 重组载体pBI121-PP2C的双酶切验证 | 第44页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第44-46页 |
| 3.4.1 小结 | 第44-45页 |
| 3.4.2 讨论 | 第45-46页 |
| 第四章 PlPP2C基因对拟南芥的遗传转化 | 第46-55页 |
| 4.1 试验材料 | 第46-47页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第46页 |
| 4.1.2 菌株及试剂 | 第46页 |
| 4.1.3 溶液及培养基的配制 | 第46-47页 |
| 4.2 试验方法 | 第47-50页 |
| 4.2.1 拟南芥的种植 | 第47-48页 |
| 4.2.2 农杆菌转化及鉴定 | 第48页 |
| 4.2.3 农杆菌介导的拟南芥转化 | 第48-49页 |
| 4.2.4 转基因拟南芥抗性植株的筛选 | 第49页 |
| 4.2.5 转基因拟南芥抗性植株的分子鉴定 | 第49-50页 |
| 4.3 结果与分析 | 第50-53页 |
| 4.3.1 拟南芥的种植情况 | 第50-51页 |
| 4.3.2 农杆菌菌落PCR鉴定 | 第51页 |
| 4.3.3 转基因拟南芥植株T0代种子的获取 | 第51-52页 |
| 4.3.4 转基因拟南芥抗性植株的获取 | 第52页 |
| 4.3.5 转基因拟南芥抗性植株的PCR检测 | 第52-53页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第53-55页 |
| 4.4.1 小结 | 第53页 |
| 4.4.2 讨论 | 第53-55页 |
| 第五章 结论与展望 | 第55-56页 |
| 5.1 结论 | 第55页 |
| 5.1.1 成功克隆芍药种子PlPP2C基因 | 第55页 |
| 5.1.2 明确PlPP2C基因的表达特征并成功构建表达载体 | 第55页 |
| 5.1.3 植物表达载体pBI-PlPP2C转化拟南芥 | 第55页 |
| 5.2 展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第64-65页 |
