| 第一部分 Vps18在小鼠神经细胞存活、迁移和树突发育中的功能研究 | 第5-67页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 背景介绍 | 第7-25页 |
| 1. 细胞内的膜泡运输系统与神经退行性疾病 | 第7-14页 |
| 1.1 细胞中的内吞系统 | 第7-9页 |
| 1.2 内吞系统紊乱与神经退行性疾病 | 第9-10页 |
| 1.3 细胞中的自噬系统 | 第10-12页 |
| 1.4 自噬系统紊乱与神经退行性疾病 | 第12-14页 |
| 2. 细胞内的膜泡运输系统与神经细胞迁移 | 第14-20页 |
| 2.1 中枢神经系统发育过程中的细胞迁移 | 第14-20页 |
| 2.2 膜泡运输与神经细胞迁移 | 第20页 |
| 3. 浦肯野细胞的树突发育 | 第20-22页 |
| 3.1 小鼠浦肯野细胞的发育过程 | 第20-21页 |
| 3.2 Lox基因与浦肯野细胞的发育 | 第21-22页 |
| 4. Vps18基因及其研究进展 | 第22-24页 |
| 4.1 Vps18基因的发现 | 第22页 |
| 4.2 Vps18基因的结构 | 第22-23页 |
| 4.3 Vps18基因的功能 | 第23-24页 |
| 5. 选题的意义 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-34页 |
| 1. Vps18基因打靶载体的构建 | 第25页 |
| 2. 胚胎干细胞的培养 | 第25-26页 |
| 3. 胚胎干细胞的转染和筛选 | 第26页 |
| 4. Southern Blot | 第26-27页 |
| 5. 嵌合体小鼠的培育 | 第27页 |
| 6. 组织切片 | 第27-28页 |
| 6.1 冰冻切片 | 第27-28页 |
| 6.2 石蜡切片 | 第28页 |
| 7. 苏木精-伊红染色(HE染色) | 第28页 |
| 8. 冰冻切片的免疫荧光染色 | 第28-29页 |
| 9. Western Blot | 第29页 |
| 10. 冰冻切片的免疫组化染色 | 第29-30页 |
| 11. 电镜 | 第30页 |
| 12. 神经细胞的流式细胞仪检测 | 第30页 |
| 13. 小鼠胚胎的子宫内电转 | 第30页 |
| 14. 小鼠的行为学分析 | 第30-31页 |
| 14.1 加速滚轮踏步机测试 | 第30-31页 |
| 14.2 平衡木测试 | 第31页 |
| 14.3 步态分析 | 第31页 |
| 15. 浦肯野细胞的树突统计 | 第31页 |
| 16. Realtime PCR | 第31-32页 |
| 17. 抗体列表 | 第32-33页 |
| 18.引物及shRNA靶序列列表 | 第33-34页 |
| 第三章 结果与分析 | 第34-64页 |
| 1. Vps18全身性基因剔除导致胚胎死亡或者早期新生儿死亡 | 第34-36页 |
| 2. Vps18基因在小鼠脑部泛表达 | 第36-38页 |
| 3. Vps18神经特异性剔除导致的神经细胞凋亡及其机制 | 第38-54页 |
| 3.1 Vps18神经特异性剔除小鼠的培育 | 第38-39页 |
| 3.2 Vps18神经特异性剔除导致新生小鼠死亡并且发育迟缓 | 第39-40页 |
| 3.3 Vps18神经特异性剔除导致严重的神经退行性疾病 | 第40-44页 |
| 3.4 Vps18 CKO小鼠中的神经细胞丢失是由凋亡导致的 | 第44-46页 |
| 3.5 Vps18神经特异性剔除阻断了神经细胞中自噬泡的降解 | 第46-48页 |
| 3.6 Vps18神经特异性剔除阻断内吞途径和溶酶体蛋白酶的加工成熟 | 第48-50页 |
| 3.7 Vps18 CKO小鼠脑组织的电镜分析 | 第50-52页 |
| 3.8 Vps18 CKO小鼠的脑组织中没有积累A拾42 | 第52-54页 |
| 4. Vps18基因在神经细胞迁移中的功能与机制 | 第54-61页 |
| 4.1 Vps18神经特异性剔除阻碍了神经细胞的迁移 | 第54-55页 |
| 4.2 自噬缺陷不影响神经细胞迁移 | 第55-56页 |
| 4.3 Vps18基因剔除不影响JNK信号通路和N-Cadherin的表达 | 第56-57页 |
| 4.4 Vps18基因剔除不影响Reelin信号通路 | 第57-58页 |
| 4.5 Vps18缺陷介导的β1 Integrin蛋白量上升阻碍神经细胞迁移 | 第58-60页 |
| 4.6 Vps18的剔除破坏了辐射状神经胶质细胞的网状结构 | 第60-61页 |
| 5. Vps18基因在浦肯野细胞树突发育中的作用与机制 | 第61-64页 |
| 5.1 Vps18 CKO小鼠中浦肯野细胞树突发育不良 | 第61-63页 |
| 5.2 Vps18缺陷阻碍Lox蛋白的降解 | 第63-64页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第64-67页 |
| 第二部分 应用piggyBac转座子在小鼠体细胞中筛选肿瘤抑制基因 | 第67-97页 |
| 摘要 | 第67-68页 |
| Abstract | 第68-69页 |
| 第一章 背景介绍 | 第69-81页 |
| 1. 肿瘤抑制基因 | 第69-72页 |
| 1.1 肿瘤抑制基因的发现 | 第69页 |
| 1.2 肿瘤抑制基因的半剂量不足效应 | 第69-70页 |
| 1.3 肿瘤抑制基因严格的半剂量不足效应 | 第70-72页 |
| 1.4 肿瘤抑制基因的剂量效应 | 第72页 |
| 2. piggyBac转座子：哺乳动物中的高效转座系统 | 第72-74页 |
| 2.1 什么是转座子 | 第72-73页 |
| 2.2 piggyBac转座系统 | 第73-74页 |
| 3. 小鼠中以插入突变为基础的癌基因筛选系统 | 第74-79页 |
| 3.1 小鼠中以病毒为基础的癌基因筛选 | 第74-76页 |
| 3.2 小鼠中以睡美人转座子为基础的癌基因筛选 | 第76-78页 |
| 3.3 小鼠中以piggyBac转座子为基础的癌基因筛选 | 第78页 |
| 3.4 用于小鼠体细胞中筛选癌基因的转座子的结构 | 第78-79页 |
| 4. 小鼠肿瘤模型 | 第79-80页 |
| 4.1 小鼠肿瘤模型的分类和特点 | 第79-80页 |
| 4.2 MMTV-neu小鼠乳腺癌模型 | 第80页 |
| 5. 选题意义 | 第80-81页 |
| 第二章 材料与方法 | 第81-85页 |
| 1. PB转基因小鼠的建立 | 第81页 |
| 2. 小鼠中转座子相对拷贝数,转座效率,甲基化程度的检测 | 第81-82页 |
| 3. Linker-mediate PCR | 第82-83页 |
| 4. 小鼠乳腺瘤的触诊 | 第83页 |
| 5. 小鼠肺部转移灶的统计 | 第83页 |
| 6. ONPG法测定β-半乳糖苷酶的活性 | 第83页 |
| 7. Luciferase活性的测定 | 第83-85页 |
| 第三章 结果与分析 | 第85-96页 |
| 1. 利用PB转座子进行抑癌基因筛选的原理和策略 | 第85-86页 |
| 2. PB[tet-off]转座子的构建与测试 | 第86-88页 |
| 3. PB[tet-off]转基因小鼠的建立 | 第88-90页 |
| 4. PB[tet-off]；Act-PBase；MMTV-neu三转基因小鼠的培育和抑癌基因筛选 | 第90-91页 |
| 5. 体细胞PB[tet-off]插入突变对MMTV-neu小鼠乳腺癌发生和转移没有明显促进作用 | 第91-92页 |
| 6. PB[tet-off]插入突变在小鼠中引发心脏肿瘤 | 第92-93页 |
| 7. PB[tet-off]在心脏肿瘤中的插入位点分析 | 第93-96页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-111页 |
| 致谢 | 第111-113页 |
