| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| Catalogue | 第11-15页 |
| 缩写字母索引 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-27页 |
| 1.1 概述 | 第16-17页 |
| 1.2 地鳖的研究与运用现状 | 第17-19页 |
| 1.3 地鳖纤溶蛋白 | 第19-20页 |
| 1.4 血栓类疾病 | 第20页 |
| 1.5 溶栓药物的研究现状 | 第20-22页 |
| 1.6 丝氨酸蛋白酶家族 | 第22-23页 |
| 1.7 纤溶酶抗肿瘤机制 | 第23页 |
| 1.8 肿瘤基因治疗的研究进展 | 第23-24页 |
| 1.9 论文的研究意义及研究主要内容 | 第24-27页 |
| 1.9.1 研究意义 | 第24页 |
| 1.9.2 研究创新 | 第24-25页 |
| 1.9.3 研究内容 | 第25-26页 |
| 1.9.4 实验流程 | 第26-27页 |
| 第二章 地鳖虫总RNA的提取与cDNA第一链的合成 | 第27-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-29页 |
| 2.1.1 实验材料和试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第28页 |
| 2.1.3 实验耗材及其处理 | 第28-29页 |
| 2.1.4 实验常用试剂的配方 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-31页 |
| 2.2.1 地鳖虫总RNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.2 RNA的检测 | 第30页 |
| 2.2.3 cDNA第一链的合成 | 第30-31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-32页 |
| 2.4 本章小结 | 第32-33页 |
| 第三章 地鳖纤溶蛋白基因的调取扩增与检测 | 第33-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第33-35页 |
| 3.1.1 菌种及载体 | 第33页 |
| 3.1.2 主要实验材料和试剂 | 第33页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第33-34页 |
| 3.1.4 常用试剂的配方 | 第34-35页 |
| 3.2 试验方法 | 第35-39页 |
| 3.2.1 地鳖纤溶蛋白酶基因的调取克隆 | 第35-36页 |
| 3.2.2 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第36-38页 |
| 3.2.3 DNA片段的TA克隆和阳性克隆的检测 | 第38-39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-42页 |
| 3.3.1 蓝白筛选 | 第39-40页 |
| 3.3.2 菌落PCR | 第40-41页 |
| 3.3.3 测序结果及对比 | 第41-42页 |
| 3.4 本章小结 | 第42-43页 |
| 第四章 pcDNA3.1(+)-EFP载体的构建 | 第43-51页 |
| 4.1 实验材料和仪器 | 第43-44页 |
| 4.1.1 试剂 | 第43页 |
| 4.1.2 所用仪器 | 第43-44页 |
| 4.2 实验方法 | 第44-47页 |
| 4.2.1 载体pcDNA3.1(+) | 第44-45页 |
| 4.2.2 pcDNA3.1(+)-EFP载体的构建与克隆 | 第45-47页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第47-51页 |
| 4.3.1 pMD19T-EFP载体双酶切验证 | 第47-48页 |
| 4.3.2 菌落PCR验证 | 第48-49页 |
| 4.3.3 pcDNA3.1(+)-EFP载体双酶切验证 | 第49-50页 |
| 4.3.4 测序结果对比 | 第50-51页 |
| 第五章 pcDNA3.1(+)-EFP脂质体转染s180细胞 | 第51-65页 |
| 5.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 5.1.1 实验仪器 | 第51页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第51-52页 |
| 5.2 细胞培养准备工作 | 第52-54页 |
| 5.2.1 细胞培养的准备工作 | 第52-54页 |
| 5.3 细胞培养实验方法 | 第54-55页 |
| 5.3.1 细胞培养和计数 | 第54页 |
| 5.3.2 细胞传代 | 第54-55页 |
| 5.3.3 细胞冻存 | 第55页 |
| 5.3.4 细胞复苏 | 第55页 |
| 5.4 细胞转染 | 第55-59页 |
| 5.4.1 选择适宜G418的筛选浓度 | 第55-56页 |
| 5.4.2 转染 | 第56-57页 |
| 5.4.3 细胞转染阳性克隆PCR验证 | 第57页 |
| 5.4.4 细胞总蛋白的提取 | 第57页 |
| 5.4.5 SDS-PAGE检测蛋白的表达情况 | 第57-59页 |
| 5.5 实验结果及分析 | 第59-63页 |
| 5.5.1 制备筛选培养液 | 第59页 |
| 5.5.2 转染细胞的PCR验证 | 第59-60页 |
| 5.5.3 转染后细胞形态的变化 | 第60-63页 |
| 5.5.4 蛋白的检测 | 第63页 |
| 5.6 本章小结 | 第63-65页 |
| 讨论与展望 | 第65-66页 |
| 1 讨论 | 第65页 |
| 2 展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
