| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| 1 本课题的研究背景 | 第11-19页 |
| 1.1 β-木糖苷酶的简介 | 第11页 |
| 1.2 β-木糖苷酶的来源 | 第11-12页 |
| 1.3 β-木糖苷酶的分类 | 第12页 |
| 1.4 β-木糖苷酶的结构 | 第12-13页 |
| 1.5 β-木糖苷酶昀催化机制 | 第13页 |
| 1.6 β-木糖苷酶的分离纯化 | 第13-14页 |
| 1.7 β-木糖苷酶的活性检测 | 第14页 |
| 1.8 β-木糖苷酶的酶学性质 | 第14-15页 |
| 1.9 β-木糖苷酶基因克隆的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.10 β-木糖苷酶基因的克隆方法 | 第16-17页 |
| 1.11 β-木糖苷酶的应用 | 第17-19页 |
| 2. 研究的思路及意义 | 第19-21页 |
| 2.1 研究思路 | 第19-20页 |
| 2.2 研究意义 | 第20-21页 |
| 第二章 目的基因的克隆 | 第21-32页 |
| 1 实验材料 | 第21-23页 |
| 1.1 供试菌株与质粒 | 第21-22页 |
| 1.2 实验仪器 | 第22-23页 |
| 1.3 试剂与酶 | 第23页 |
| 1.4 试剂配制 | 第23页 |
| 2 试验方法 | 第23-28页 |
| 2.1 引物设计 | 第23-24页 |
| 2.2 基因组提取 | 第24-26页 |
| 2.3 PCR产物纯化 | 第26页 |
| 2.4 目的基因的克隆 | 第26-27页 |
| 2.5 测序结果分析 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-30页 |
| 3.1 黑曲霉基因组的提取结果 | 第28页 |
| 3.2 目的基因扩增结果 | 第28-29页 |
| 3.3 目的基因的克隆及测序验证结果 | 第29页 |
| 3.4 测序结果及分析 | 第29-30页 |
| 4 本章小结 | 第30-32页 |
| 第三章 β-木糖苷酶基因的原核表达 | 第32-40页 |
| 1 实验材料 | 第33页 |
| 2 试验方法 | 第33-36页 |
| 2.1 引物设计 | 第33页 |
| 2.2 克隆质粒及表达质粒pET32a的提取 | 第33-34页 |
| 2.3 目的基因的PCR扩增 | 第34页 |
| 2.4 载体及目的基因的双酶切及胶回收 | 第34页 |
| 2.5 酶切片段的连接 | 第34-35页 |
| 2.6 连接产物转化E.coli DH5α感受态细胞 | 第35页 |
| 2.7 重组质粒的验证 | 第35-36页 |
| 2.8 重组质粒电转E.coli BL2I(DE3)感受态细胞 | 第36页 |
| 2.9 蛋白在E.coli BL21中的表达 | 第36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-39页 |
| 3.1 目的基因的PCR结果 | 第36-37页 |
| 3.2 质粒及目的基因双酶切结果 | 第37页 |
| 3.3 重组质粒的验证结果 | 第37-38页 |
| 3.4 蛋白在E.coli BL21中的表达结果 | 第38-39页 |
| 4 本章小结 | 第39-40页 |
| 第四章 β-木糖苷酶基因的真核表达 | 第40-64页 |
| 1 实验材料 | 第41页 |
| 2 实验方法 | 第41-50页 |
| 2.1 引物的设计 | 第41-42页 |
| 2.2 克隆质粒及表达质粒pPICZαA的提取 | 第42页 |
| 2.3 目的基因的PCR扩增 | 第42页 |
| 2.4 载体及目的基因的双酶切及胶回收 | 第42-43页 |
| 2.5 酶切片段的连接及转化 | 第43页 |
| 2.6 重组子的鉴定 | 第43页 |
| 2.7 重组子的线性化 | 第43-44页 |
| 2.8 酵母感受态细胞制备 | 第44页 |
| 2.9 重组表达载体的转化 | 第44-45页 |
| 2.10 重组毕赤酵母菌株的PCR快速鉴定 | 第45页 |
| 2.11 重组酵母菌株的诱导表达 | 第45-46页 |
| 2.12 酶活检测 | 第46-47页 |
| 2.13 高酶活菌株筛选 | 第47页 |
| 2.14 表达条件优化 | 第47-50页 |
| 2.15 蛋白纯化 | 第50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-63页 |
| 3.1 目的基因的扩增结果 | 第50页 |
| 3.2 目的基因及质粒pPICZαA载体的双酶切结果 | 第50-51页 |
| 3.3 重组子的鉴定结果 | 第51-52页 |
| 3.4 重组质粒的线性化结果 | 第52页 |
| 3.5 重组酵母的PCR快速鉴定结果 | 第52-53页 |
| 3.6 酶活检测结果 | 第53页 |
| 3.7 高酶活菌株的筛选结果 | 第53-54页 |
| 3.8 表达条件优化结果 | 第54-62页 |
| 3.9 蛋白纯化结果 | 第62-63页 |
| 4 本章小结 | 第63-64页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第64-66页 |
| 1 总结 | 第64页 |
| 2 创新点 | 第64-65页 |
| 3 展望 | 第65-66页 |
| 附录 | 第66-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
