| 摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-20页 |
| 1.1 研究的目的和意义 | 第13页 |
| 1.2 国内外研究进展 | 第13-18页 |
| 1.2.1 解决蔬菜农药残留问题的重要意义 | 第13-15页 |
| 1.2.2 霜霉威残留的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2.3 WRKY转录因子家族 | 第17-18页 |
| 1.3 研究内容及技术路线 | 第18-20页 |
| 1.3.1 试验主要内容 | 第18-19页 |
| 1.3.2 试验技术路线 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-31页 |
| 2.1 试验材料 | 第20页 |
| 2.1.1 霜霉威胁迫材料获得 | 第20页 |
| 2.1.2 其他逆境胁迫材料获得 | 第20页 |
| 2.1.3 试验所用拟南芥材料 | 第20页 |
| 2.2 试验试剂及菌株 | 第20-21页 |
| 2.3 CsWRKY30基因的克隆 | 第21-23页 |
| 2.3.1 黄瓜果实RNA的提取与检测 | 第21页 |
| 2.3.2 cDNA第1链的合成 | 第21页 |
| 2.3.3 CsWRKY30基因的克隆 | 第21-22页 |
| 2.3.4 CsWRKY30基因PCR扩增产物的回收 | 第22页 |
| 2.3.5 连接pEASY-T3载体与阳性克隆筛选 | 第22-23页 |
| 2.4 CsWRKY30基因的序列分析 | 第23页 |
| 2.5 CsWRKY30表达模式分析 | 第23-24页 |
| 2.6 CsWRKY30亚细胞定位分析 | 第24-26页 |
| 2.6.1 植物绿色荧光表达载体的构建 | 第24-25页 |
| 2.6.2 高浓度质粒的制备 | 第25页 |
| 2.6.3 拟南芥原生质体细胞的提取 | 第25页 |
| 2.6.4 pCAMBIA1302-CsWRKY30质粒转化拟南芥原生质体 | 第25-26页 |
| 2.7 CsWRKY30基因对拟南芥的遗传转化 | 第26-27页 |
| 2.7.1 CsWRKY30植物过量表达载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.7.2 重组质粒导入根癌农杆菌 | 第27页 |
| 2.8 花序侵染法将pCAMBIA1303-CsWRKY30转入拟南芥 | 第27-29页 |
| 2.8.1 拟南芥转基因植株T0代种子获得 | 第27-28页 |
| 2.8.2 潮霉素（Hygr）抗压浓度的确定 | 第28页 |
| 2.8.3 拟南芥纯合株系的获得 | 第28-29页 |
| 2.8.4 转基因拟南芥的分子鉴定 | 第29页 |
| 2.8.5 转基因拟南芥在霜霉威胁迫下的功能分析 | 第29页 |
| 2.9 CsWRKY30基因对黄瓜遗传转化 | 第29-31页 |
| 2.9.1 试验材料与培养基 | 第29-30页 |
| 2.9.2 转基因实验方法 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-45页 |
| 3.1 CsWRKY30基因的克隆 | 第31-32页 |
| 3.1.1 植物总RNA的提取 | 第31页 |
| 3.1.2 CsWRKY30基因全长及酶切验证 | 第31-32页 |
| 3.2 CsWRKY30序列分析 | 第32-34页 |
| 3.2.1 CsWRKY30基因序列分析 | 第32页 |
| 3.2.2 系统发生树分析 | 第32-33页 |
| 3.2.3 启动子顺式元件分析 | 第33-34页 |
| 3.3 CsWRKY30基因表达模式分析 | 第34-36页 |
| 3.3.1 CsWRKY30在霜霉威残留量不同的黄瓜品种中的表达分析 | 第34页 |
| 3.3.2 CsWRKY30基因时空表达特性分析 | 第34-35页 |
| 3.3.3 CsWRKY30组织特异性表达分析 | 第35-36页 |
| 3.4 CsWRKY30亚细胞定位分析 | 第36-37页 |
| 3.4.1 pCAMBIA1302-CsWRKY30融合表达载体的鉴定 | 第36页 |
| 3.4.2 拟南芥原生质体中的定位与分析 | 第36-37页 |
| 3.5 CsWRKY30基因在霜霉威胁迫下的功能分析 | 第37-41页 |
| 3.5.1 植物过量表达载体pCAMBIA1303-CsWRKY30的构建 | 第37-38页 |
| 3.5.2 35S-CsWRKY30植物过量表达载体转入根癌农杆菌 | 第38页 |
| 3.5.3 潮霉素筛选抗压的确定 | 第38-39页 |
| 3.5.4 转基因拟南芥抗性植株的筛选 | 第39页 |
| 3.5.5 转基因植株的PCR检测 | 第39页 |
| 3.5.6 转基因拟南芥纯合株系的荧光PCR鉴定 | 第39-40页 |
| 3.5.7 转CsWRKY30基因拟南芥在霜霉威胁迫下功能分析 | 第40-41页 |
| 3.6 CsWRKY30受脱落酸诱导表达分析 | 第41-42页 |
| 3.7 其他逆境胁迫CsWRKY30表达分析 | 第42-43页 |
| 3.8 黄瓜遗传转化 | 第43-45页 |
| 3.8.1 CsWRKY30转基因黄瓜的获得 | 第43页 |
| 3.8.2 抗性黄瓜植株的分子鉴定 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| 4.1 CsWRKY30启动子中的顺式元件 | 第45页 |
| 4.2 CsWRKY30基因具有独特的响应模式 | 第45-46页 |
| 4.3 CsWRKY30是核主效蛋白 | 第46页 |
| 4.4 CsWRKY30的过表达可以提高拟南芥对霜霉威的耐受性 | 第46页 |
| 4.5 CsWRKY30受ABA信号诱导 | 第46-47页 |
| 4.6 CsWRKY30基因参与生物胁迫 | 第47页 |
| 4.7 展望 | 第47-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-58页 |
| 附录 | 第58-61页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第61页 |
