| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-23页 |
| ·海洋微生物 | 第9-11页 |
| ·海洋微生物特点 | 第9-10页 |
| ·海洋细菌的鉴定 | 第10-11页 |
| ·低温微生物与低温酶 | 第11-17页 |
| ·低温微生物 | 第11-13页 |
| ·低温酶 | 第13-17页 |
| ·适冷蛋白酶 | 第17-22页 |
| ·蛋白酶的定义 | 第17页 |
| ·蛋白酶的分类 | 第17-18页 |
| ·适冷蛋白酶来源 | 第18-19页 |
| ·适冷蛋白酶的酶学特征 | 第19-20页 |
| ·适冷蛋白酶的结构特征 | 第20-21页 |
| ·适冷蛋白酶的应用 | 第21-22页 |
| ·本论文研究内容 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-35页 |
| ·细菌鉴定 | 第23-27页 |
| ·菌种与培养基 | 第23页 |
| ·形态特征观察 | 第23-24页 |
| ·生理生化特征鉴定 | 第24-25页 |
| ·16S rDNA序列测定以及16S rDNA序列系统发育分析 | 第25-27页 |
| ·HW08胞外蛋白酶Ps5的分离纯化 | 第27-31页 |
| ·试剂与主要仪器 | 第27页 |
| ·蛋白酶活力测定标准方法 | 第27页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第27-28页 |
| ·蛋白酶的纯化 | 第28页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳 | 第28-30页 |
| ·蛋白活性电泳 | 第30-31页 |
| ·Ps5酶学性质研究 | 第31-32页 |
| ·蛋白酶的类型鉴定 | 第31页 |
| ·Ps5最适作用条件 | 第31页 |
| ·Ps5稳定性研究 | 第31-32页 |
| ·Ps5的基因克隆 | 第32-35页 |
| ·菌株与试剂 | 第32-33页 |
| ·HW08基因组的提取 | 第33页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·酶切与末端半补齐反应 | 第33页 |
| ·连接与转化 | 第33页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第33-35页 |
| 3 实验结果 | 第35-54页 |
| ·HW08的鉴定 | 第35-38页 |
| ·形态特征 | 第35页 |
| ·生理生化特征 | 第35-37页 |
| ·序列比对与系统发育树的构建 | 第37-38页 |
| ·胞外蛋白酶Ps5的分离纯化 | 第38-42页 |
| ·标准曲线的制作 | 第38-39页 |
| ·纯化流程 | 第39-40页 |
| ·纯化倍数 | 第40页 |
| ·SDS-PAGE电泳及活性染色 | 第40-42页 |
| ·Ps5酶学性质 | 第42-49页 |
| ·Ps5的归类 | 第42页 |
| ·最适温度及温度稳定性 | 第42-46页 |
| ·最适pH及pH稳定性 | 第46-47页 |
| ·金属离子的影响 | 第47-48页 |
| ·洗涤添加剂对Ps5活性的影响 | 第48-49页 |
| ·Ps5基因克隆 | 第49-54页 |
| ·基因组酶切 | 第49-50页 |
| ·质粒酶切 | 第50页 |
| ·连接与转化 | 第50-51页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第51-53页 |
| ·分析讨论 | 第53-54页 |
| 4 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
| 个人简历 | 第61页 |
| 发表的学术论文 | 第61页 |