| 致谢 | 第11-12页 |
| 缩略表 | 第12-13页 |
| 摘要 | 第13-15页 |
| Abstract | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-31页 |
| 1.1 引言 | 第17页 |
| 1.2 酵母PHO通路 | 第17-21页 |
| 1.2.1 转录因子Pho4和Pho2 | 第18-19页 |
| 1.2.2 Pho80-Pho85-Pho81复合物对Pho4的调控 | 第19-20页 |
| 1.2.3 酵母磷转运体 | 第20-21页 |
| 1.3 植物磷饥饿信号途径 | 第21-30页 |
| 13.1 植物磷信号中心调控因子PHR以及其他的转录因子 | 第22-24页 |
| 1.3.2 磷信号中的microRNA及其靶基因和非编码RNA | 第24-25页 |
| 1.3.3 植物磷转运体(Phosphate transporter)及其调控 | 第25-27页 |
| 1.3.4 SPX结构域的蛋白分类与功能简介 | 第27-30页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第30-31页 |
| 第二章 SPX4和SPX6的组织表达模式和对磷的响应 | 第31-50页 |
| 2.1 引言 | 第31页 |
| 2.2 材料与方法 | 第31-35页 |
| 2.2.1 材料 | 第31页 |
| 2.2.2 溶液培养实验 | 第31-32页 |
| 2.2.3 水稻根、叶总RNA的提取以及第一链cDNA合成 | 第32页 |
| 2.2.4 水稻DNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.5 SPX6自身启动子基因组融合GFP和GUS载体构建 | 第33页 |
| 2.2.6 冻融法转化农杆菌和农杆菌介导的水稻转化 | 第33页 |
| 2.2.7 RNA原位杂交 | 第33-34页 |
| 2.2.8 GUS染色与显微观察 | 第34页 |
| 2.2.9 SPX4和SPX6亚细胞定位 | 第34页 |
| 2.2.10 EMSA凝胶阻滞 | 第34-35页 |
| 2.2.11 水稻总蛋白提取以及Westren Bolt检测 | 第35页 |
| 2.2.12 烟草瞬时转化 | 第35页 |
| 2.3 结果与分析 | 第35-48页 |
| 2.3.1 SPX4和SPX6转录水平的磷响应 | 第35-36页 |
| 2.3.2 PHR2直接调控SPX6缺磷诱导 | 第36-38页 |
| 2.3.3 不同供磷条件下SPX4蛋白融合GUS组织表达分析 | 第38-40页 |
| 2.3.4 OsSPX6基因的表达模式分析 | 第40-42页 |
| 2.3.5 SPX4蛋白亚细胞定位分析 | 第42-43页 |
| 2.3.6 SPX6蛋白亚细胞定位分析 | 第43-45页 |
| 2.3.7 SPX6蛋白水平的磷响应 | 第45-46页 |
| 2.3.8 植物体内SPX4蛋白稳定性依赖于磷浓度 | 第46-47页 |
| 2.3.9 SPX4蛋白C端影响SPX4蛋白的稳定性 | 第47-48页 |
| 2.4 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 SPX4、SPX6超表达影响水稻磷平衡和磷响应 | 第50-59页 |
| 3.1 引言 | 第50页 |
| 3.2 材料与方法 | 第50-51页 |
| 3.2.1 材料 | 第50页 |
| 3.2.2 SPX6超表达遗传材料发展 | 第50页 |
| 3.2.3 水稻的遗传转化和阳性苗筛选 | 第50页 |
| 3.2.4 RNA提取以及半定量分析 | 第50-51页 |
| 3.2.5 Southern分析 | 第51页 |
| 3.3 结果与分析 | 第51-58页 |
| 3.3.1 SPX4超表达材料鉴定和水培生理表型及生理分析 | 第51-54页 |
| 3.3.2 SPX6超表达材料鉴定和水培生理表型及生理分析 | 第54-56页 |
| 3.3.3 SPX4和SPX6超表达对水稻缺磷响应的影响 | 第56-58页 |
| 3.4 讨论 | 第58-59页 |
| 第四章 spx4和spx6突变影响水稻磷信号和磷平衡 | 第59-76页 |
| 4.1 引言 | 第59页 |
| 4.2 材料与方法 | 第59-65页 |
| 4.2.1 材料 | 第59页 |
| 4.2.2 TALEN原理 | 第59-60页 |
| 4.2.3 OsSPX4和OsSPX6 TALEN载体构建 | 第60-63页 |
| 4.2.4 水稻转基因以及T_0代转基因苗鉴定 | 第63-64页 |
| 4.2.5 野生型、spx4、spx6、spx4/spx6和PHR2-Ov根毛观察 | 第64页 |
| 4.2.6 野生型、spx4、spx6、spx4/spx6和PHR2-Ov水培处理 | 第64页 |
| 4.2.7 spx4和spx6表型回复实验 | 第64-65页 |
| 4.3 结果与分析 | 第65-75页 |
| 4.3.1 SSA luciferase报告基因检测TALEN序列活性 | 第65页 |
| 4.3.2 spx4和spx6突变体的鉴定 | 第65-66页 |
| 4.3.3 spx4和spx6突变体水培表型和磷养分分析 | 第66-69页 |
| 4.3.4 spx4、spx6、spx4/spx6和PHR2-Ov的根毛观察 | 第69-70页 |
| 4.3.5 spx4/spx6双突加性 | 第70-74页 |
| 4.3.6 spx4、spx6表型回复实验 | 第74-75页 |
| 4.4 讨论 | 第75-76页 |
| 第五章 SPX4和SPX6调控磷信号的分子机制与模型 | 第76-92页 |
| 5.1 引言 | 第76页 |
| 5.2 材料与方法 | 第76-78页 |
| 5.2.1 材料 | 第76页 |
| 5.2.2 酵母双杂交实验 | 第76页 |
| 5.2.3 蛋白原核表达以及体外pulldown实验 | 第76-77页 |
| 5.2.4 蛋白免疫共沉淀 | 第77页 |
| 5.2.5 双分子荧光互补实验 | 第77页 |
| 5.2.6 烟草双荧光瞬时表达实验 | 第77-78页 |
| 5.2.7 EMSA凝胶阻滞实验 | 第78页 |
| 5.3 结果与分析 | 第78-90页 |
| 5.3.1 SPX4和SPX6蛋白和PHR2的体外互作 | 第78-80页 |
| 5.3.2 SPX4和SPX6蛋白和PHR2的在植物体内互作 | 第80-81页 |
| 5.3.3 SPX4影响PHR2亚细胞定位 | 第81-82页 |
| 5.3.4 SPX4和SPX6抑制PHR2的功能 | 第82-86页 |
| 5.3.5 OsSPX4和OsSPX6与OsPHR2遗传互作 | 第86-88页 |
| 5.3.6 OsSPX4和OsSPX6在水稻缺磷响应中的调控模型 | 第88-90页 |
| 5.4 讨论 | 第90-92页 |
| 第六章 结论与展望 | 第92-94页 |
| 6.1 结论 | 第92-93页 |
| 6.2 展望 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-108页 |
| 附录 | 第108-117页 |
| 作者简历及博士期间发表的论文 | 第117页 |
