| 摘要 | 第3-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 中英文缩略词表 | 第19-21页 |
| 第1章 引言 | 第21-25页 |
| 1.1 概述 | 第21页 |
| 1.2 CagA~+H. pylori菌株具有强致病性，可增加胃癌的发生风险 | 第21-22页 |
| 1.3 Hippo/YAP信号的异常调控与多种肿瘤的发生发展密切相关 | 第22-24页 |
| 1.4 Hippo/YAP信号异常引起的YAP激活入核可促进上皮间充质转化，CagA~+H. pylori感染也可促进上皮间充质转化 | 第24-25页 |
| 第2章 探讨H. pylori感染对胃癌上皮细胞Hippo/YAP信号通路的影响 | 第25-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-31页 |
| 2.1.1 临床组织标本及资料收集 | 第25页 |
| 2.1.2 标准菌株、细胞 | 第25页 |
| 2.1.3 主要试剂及耗材 | 第25-28页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.5 溶液配制 | 第29-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-42页 |
| 2.2.1 病理组织标本的取材及处理 | 第31-32页 |
| 2.2.2 病理学实验 | 第32-34页 |
| 2.2.3 细菌培养 | 第34-35页 |
| 2.2.4 细胞培养 | 第35-37页 |
| 2.2.5 构建H. pylori体外感染AGS细胞模型 | 第37页 |
| 2.2.6 Western blot检测AGS细胞中各目的蛋白表达 | 第37-40页 |
| 2.2.7 qRT-PCR实验检测基因表达检测 | 第40-42页 |
| 2.2.8 统计学分析 | 第42页 |
| 2.3 实验结果 | 第42-51页 |
| 2.3.1 检测YAP、TAZ在人临床胃癌组织标本中的表达 | 第42-47页 |
| 2.3.2 CagA~+H. pylori感染导致Hippo-YAP信号通路中YAP总蛋白及磷酸化水平上调 | 第47-50页 |
| 2.3.3 CagA~+H. pylori感染上调YAP及其下游靶基因CTGF、CYR61 mRNA水平 | 第50-51页 |
| 2.4 讨论 | 第51-54页 |
| 第3章 幽门螺杆菌cagA基因敲除PMSS1△cagA突变菌株的构建与鉴定 | 第54-80页 |
| 3.1 实验材料 | 第54-57页 |
| 3.1.1 菌株 | 第54页 |
| 3.1.2 质粒 | 第54-55页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第55页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第55-56页 |
| 3.1.5 主要溶液配制 | 第56-57页 |
| 3.2 实验方法 | 第57-68页 |
| 3.2.1 cagA基因敲除PMSS1△cagA突变菌株构建示意图 | 第57-58页 |
| 3.2.2 H. pylori细菌DNA提取 | 第58页 |
| 3.2.3 重叠PCR构建PMSS1 cagA up-dn扩增片段 | 第58-60页 |
| 3.2.4 重组质粒cagA up-dn的构建 | 第60-63页 |
| 3.2.5 cagA敲除的重组质粒PMSS1 △cagA构建 | 第63-66页 |
| 3.2.6 构建PMSS1cagA基因敲除的突变菌株 | 第66-67页 |
| 3.2.7 cagA基因敲除突变菌株PMSS1△cagA的鉴定 | 第67-68页 |
| 3.3 实验结果 | 第68-77页 |
| 3.3.1 cagA-up、cagA-dn扩增片段结果 | 第68-69页 |
| 3.3.2 重叠PCR扩增cagA up-dn基因片段结果 | 第69-70页 |
| 3.3.3 菌落直接PCR法筛选重组克隆cagA up-dn结果 | 第70-71页 |
| 3.3.4 EcoRI酶切鉴定cagA up-dn质粒结果 | 第71-72页 |
| 3.3.5 smal I酶切cagA up-dn质粒结果 | 第72页 |
| 3.3.6 cat基因盒扩增片段结果 | 第72-73页 |
| 3.3.7 菌落直接PCR法鉴定cat基因盒插入cagA up-dn质粒中的方向 | 第73-74页 |
| 3.3.8 PCR鉴定PMSS1△cagA突变菌株中cagA是否被敲除 | 第74-75页 |
| 3.3.9 PCR鉴定PMSS1△cagA突变菌株中cat基因盒插入方向是否转入质粒相符 | 第75-76页 |
| 3.3.10 Western blot检测PMSS1△cagA菌株中CagA表达 | 第76-77页 |
| 3.4 讨论 | 第77-80页 |
| 第4章 毒力因子CagA在幽门螺杆菌诱导YAP表达、核移位及转录活性中的作用机制研究 | 第80-92页 |
| 4.1 实验材料 | 第80-81页 |
| 4.1.1 临床组织标本、菌株、细胞 | 第80页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第80页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第80-81页 |
| 4.1.4 主要溶液配制 | 第81页 |
| 4.2 实验方法 | 第81-83页 |
| 4.2.1 探讨PMSS1 WT菌株及△cagA突变菌株感染细胞后CagA转运水平及细胞表型变化 | 第81-82页 |
| 4.2.2 探讨PMSS1 WT菌株及△cagA突变菌株对细胞内YAP表达、核移位及转录活性中的作用机制研究 | 第82-83页 |
| 4.3 实验结果 | 第83-89页 |
| 4.3.1 PMSS1△cagA突变菌株感染宿主细胞后CagA的转运及其磷酸化水平检测 | 第83-84页 |
| 4.3.2 不同胃黏膜病变阶段分离的临床H. pylori菌株感染宿主细胞后CagA的转运及其磷酸化水平检测 | 第84-85页 |
| 4.3.3 PMSS1△cagA突变菌株感染宿主细胞后对细胞表型的影响 | 第85-86页 |
| 4.3.4 CagA敲除后显著抑制了H. pylori诱导的原癌基因YAP表达 | 第86-87页 |
| 4.3.5 CagA敲除后可阻止H. pylori感染促进的细胞内YAP核移位 | 第87-88页 |
| 4.3.6 CagA敲除抑制H. pylori诱导的YAP及其下游靶基因CTGF、CYR61的mRNA表达 | 第88-89页 |
| 4.4 讨论 | 第89-92页 |
| 第5章 Hippo/YAP通路的激活在H. pylori CagA诱导上皮间充质转化过程中的作用 | 第92-112页 |
| 5.1 实验材料 | 第92-93页 |
| 5.1.1 临床组织标本 | 第92页 |
| 5.1.2 标准菌株、细胞系 | 第92页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第92-93页 |
| 5.1.4 主要溶液配制 | 第93页 |
| 5.2 实验方法 | 第93-96页 |
| 5.2.1 探讨YAP过表达后是否促进EMT的发生 | 第93-94页 |
| 5.2.2 明确CagA对EMT的影响 | 第94-95页 |
| 5.2.3 探讨YAP的激活在H. pylori CagA诱导EMT发生过程中的作用 | 第95-96页 |
| 5.2.4 检测人体胃黏膜不同病变阶段组织中YAP、E-cadherin的表达及其与H. pylori感染的关系 | 第96页 |
| 5.3 实验结果 | 第96-108页 |
| 5.3.1 YAP过表达促进EMT发生 | 第96-97页 |
| 5.3.2 CagA的敲除可恢复部分H. pylori感染导致的E-cadherin水平下调 | 第97-98页 |
| 5.3.3YAP抑制剂Verteporfin可恢复部分CagA~+H. pylori感染导致的E-cadherin水平下调 | 第98-99页 |
| 5.3.4 YAP抑制剂Verteporfin可有效抑制CagA~+H. pylori感染导致的YAP下游靶基因CTGF、CYR61，并恢复E-cadherin的mRNA水平 | 第99-100页 |
| 5.3.5 YAP抑制剂Verteporfin可有效抑制CagA~+H. pylori感染导致的EMT间充质特征蛋白N-cadherin、Slug表达的增加 | 第100-101页 |
| 5.3.6 YAP抑制剂Verteporfin可有效抑制CagA~+H. pylori感染诱导的细胞侵袭迁移 | 第101-103页 |
| 5.3.7 随着胃黏膜病变阶段的加深（胃炎→肠化→增生→胃癌），人体胃黏膜组织中YAP的表达逐渐增加，反之，E-cadherin表达逐渐下调，且二者表达呈负相关 | 第103-107页 |
| 5.3.8 H. pylori感染的非萎缩性胃炎患者，与H. pylori未感染的胃炎患者相比，YAP的表达明显增加，E-cadherin的表达明显下调 | 第107-108页 |
| 5.4 讨论 | 第108-112页 |
| 第6章 结论 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第123-125页 |
| 综述 | 第125-136页 |
| 参考文献 | 第131-136页 |
