| 摘要 | 第14-16页 |
| ABSTRACT | 第16-17页 |
| 符号说明 | 第18-20页 |
| 第一章 前言 | 第20-38页 |
| 1.1 虫草素研究进展 | 第20-25页 |
| 1.1.1 虫草素的理化性质 | 第20页 |
| 1.1.2 虫草素的主要获得途径 | 第20-21页 |
| 1.1.2.1 虫草素的化学合成 | 第20-21页 |
| 1.1.2.2 天然虫草素的提取 | 第21页 |
| 1.1.3 虫草素的分离纯化 | 第21-22页 |
| 1.1.3.1 AB-8大孔树脂简介 | 第21-22页 |
| 1.1.3.2 酸性氧化铝简介 | 第22页 |
| 1.1.4 虫草素的检测方法 | 第22页 |
| 1.1.5 虫草素生理活性简介 | 第22-25页 |
| 1.1.5.1 增强免疫力作用 | 第22-23页 |
| 1.1.5.2 抗菌、抗病毒作用 | 第23页 |
| 1.1.5.3 抗肿瘤作用 | 第23-25页 |
| 1.1.5.4 其它作用 | 第25页 |
| 1.2 非小细胞肺癌的研究现状 | 第25-28页 |
| 1.2.1 肺癌的发生 | 第25-26页 |
| 1.2.2 非小细胞肺癌的分类 | 第26-27页 |
| 1.2.3 非小细胞肺癌治疗现状 | 第27-28页 |
| 1.3 细胞凋亡 | 第28-32页 |
| 1.3.1 细胞凋亡与肿瘤 | 第28-29页 |
| 1.3.2 细胞凋亡的主要信号途径 | 第29-31页 |
| 1.3.2.1 细胞外源凋亡途径 | 第29-30页 |
| 1.3.2.2 细胞内源凋亡途径 | 第30-31页 |
| 1.3.3 c-FLIP在细胞凋亡中的作用 | 第31-32页 |
| 1.4 mTOR信号通路 | 第32-33页 |
| 1.4.1 mTOR信号通路的组成 | 第32页 |
| 1.4.2 mTOR的生物学功能 | 第32-33页 |
| 1.5 细胞自噬 | 第33-35页 |
| 1.5.1 细胞自噬及其发生过程 | 第33-34页 |
| 1.5.2 细胞自噬与肿瘤 | 第34-35页 |
| 1.5.2.1 自噬与肿瘤存活 | 第34-35页 |
| 1.5.2.2 自噬与肿瘤抑制 | 第35页 |
| 1.6 细胞凋亡与自噬 | 第35-36页 |
| 1.6.1 凋亡与自噬共同促进细胞死亡 | 第35页 |
| 1.6.2 自噬抑制凋亡 | 第35-36页 |
| 1.6.3 自噬促进凋亡 | 第36页 |
| 1.7 本课题的研究内容和意义 | 第36-38页 |
| 第二章 虫草素纯化工艺的优化 | 第38-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 2.1.1 药品和试剂 | 第38页 |
| 2.1.1.1 药品 | 第38页 |
| 2.1.1.2 试剂 | 第38页 |
| 2.1.2 仪器与耗材 | 第38-39页 |
| 2.1.2.1 实验仪器 | 第38-39页 |
| 2.1.2.2 实验耗材 | 第39页 |
| 2.2 实验方法 | 第39-41页 |
| 2.2.1 虫草素的提取 | 第39页 |
| 2.2.2 虫草素的纯化 | 第39-40页 |
| 2.2.3 虫草素结晶与重结晶 | 第40页 |
| 2.2.4 虫草素的纯度与结构检测 | 第40-41页 |
| 2.2.4.1 紫外光谱测定 | 第40页 |
| 2.2.4.2 高效液相色谱检测 | 第40-41页 |
| 2.2.4.3 红外图谱测定 | 第41页 |
| 2.2.4.4 核磁共振分析 | 第41页 |
| 2.2.4.5 质谱分析 | 第41页 |
| 2.2.5 统计学分析 | 第41页 |
| 2.3 实验结果 | 第41-47页 |
| 2.3.1 不同乙醇浓度对虫草素提取量的影响 | 第41-42页 |
| 2.3.2 不同乙醇浓度对虫草素洗脱效果的影响 | 第42-44页 |
| 2.3.3 虫草素提取工艺的验证 | 第44页 |
| 2.3.4 虫草素纯品的纯度检测和结构鉴定 | 第44-47页 |
| 2.4 本章小结与讨论 | 第47-48页 |
| 第三章 虫草素诱导人类非小细胞肺癌细胞凋亡及其机理的研究 | 第48-66页 |
| 3.1 实验材料 | 第48-52页 |
| 3.1.1 细胞株 | 第48页 |
| 3.1.2 药品和试剂 | 第48-49页 |
| 3.1.2.1 药品 | 第49页 |
| 3.1.2.2 试剂 | 第49页 |
| 3.1.3 仪器和耗材 | 第49-50页 |
| 3.1.3.1 主要仪器 | 第49-50页 |
| 3.1.3.2 主要耗材 | 第50页 |
| 3.1.4 溶液及试剂配方 | 第50-52页 |
| 3.1.4.1 细胞培养相关试剂和配方 | 第50页 |
| 3.1.4.2 蛋白裂解试剂和配方 | 第50-51页 |
| 3.1.4.3 Western blot所用试剂和配方 | 第51-52页 |
| 3.1.4.4 其它试剂和配方 | 第52页 |
| 3.2 实验方法 | 第52-57页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第52-53页 |
| 3.2.1.1 细胞传代 | 第52-53页 |
| 3.2.1.2 细胞接种 | 第53页 |
| 3.2.1.3 细胞冻存 | 第53页 |
| 3.2.1.4 复苏细胞 | 第53页 |
| 3.2.2 SRB染色测定细胞存活率 | 第53-54页 |
| 3.2.3 Western Blot | 第54-56页 |
| 3.2.3.1 提取细胞总蛋白 | 第54页 |
| 3.2.3.2 考马斯亮蓝法测定蛋白浓度 | 第54-55页 |
| 3.2.3.3 Western blot检测 | 第55-56页 |
| 3.2.4 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第56-57页 |
| 3.2.5 统计学分析 | 第57页 |
| 3.3 实验结果 | 第57-64页 |
| 3.3.1 虫草素能抑制NSCLC细胞的生长和增殖 | 第57页 |
| 3.3.2 虫草素能诱导NSCLC细胞发生Caspase依赖的凋亡 | 第57-60页 |
| 3.3.3 虫草素通过内源途径诱导细胞凋亡 | 第60-62页 |
| 3.3.4 虫草素通过外源途径诱导细胞凋亡 | 第62-64页 |
| 3.4 本章小结与讨论 | 第64-66页 |
| 第四章 虫草素诱导的细胞自噬与凋亡关系的研究 | 第66-74页 |
| 4.1 实验材料 | 第66-67页 |
| 4.1.1 细胞株 | 第66页 |
| 4.1.2 药品与试剂 | 第66-67页 |
| 4.1.2.1 药品 | 第66页 |
| 4.1.2.2 试剂 | 第66-67页 |
| 4.1.3 仪器与耗材 | 第67页 |
| 4.1.4 试剂与溶剂配方 | 第67页 |
| 4.2 实验方法 | 第67-68页 |
| 4.2.1 siRNA转染 | 第67页 |
| 4.2.2 其它实验方法 | 第67-68页 |
| 4.3 实验结果 | 第68-72页 |
| 4.3.1 虫草素可抑制NSCLC细胞中的mTOR信号途径 | 第68页 |
| 4.3.2 虫草素可诱导人类NSCLC细胞发生自噬 | 第68-69页 |
| 4.3.3 虫草素诱导的细胞自噬可促进细胞凋亡 | 第69-72页 |
| 4.4 本章小结与讨论 | 第72-74页 |
| 第五章 总结与展望 | 第74-76页 |
| 5.1 本文总结 | 第74-75页 |
| 5.2 前景展望 | 第75-76页 |
| 附录 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文和参加科研情况 | 第88-89页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第89页 |
