| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-28页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第12页 |
| 1.2 迟缓爱德华氏菌 | 第12-14页 |
| 1.3 Ⅲ型分泌系统概述 | 第14-15页 |
| 1.4 Ⅲ型分泌系统的分子伴侣 | 第15-16页 |
| 1.5 Ⅲ型分泌系统的结构研究进展 | 第16-18页 |
| 1.5.1 Ⅲ型分泌系统的结构概述 | 第16-17页 |
| 1.5.2 Needle和Needle蛋白 | 第17-18页 |
| 1.5.3 Needle蛋白与其分子伴侣复合物 | 第18页 |
| 1.6 蛋白质相互作用的检测 | 第18-20页 |
| 1.6.1 酵母双杂交 | 第18-19页 |
| 1.6.2 GST pull down | 第19-20页 |
| 1.7 结构生物学 | 第20-26页 |
| 1.7.1 结构生物学概述 | 第20页 |
| 1.7.2 蛋白质结晶 | 第20-21页 |
| 1.7.3 晶体数据收集 | 第21-22页 |
| 1.7.4 晶体结构解析 | 第22-26页 |
| 1.8 本研究的背景、目的与意义 | 第26-28页 |
| 2 实验材料与方法 | 第28-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第28页 |
| 2.2 生物信息学分析 | 第28-29页 |
| 2.3 酵母双杂交 | 第29页 |
| 2.4 表达载体构建 | 第29-30页 |
| 2.5 蛋白表达与纯化 | 第30-32页 |
| 2.5.1 蛋白表达与亲和纯化 | 第30-31页 |
| 2.5.2 Orf13/EsaH复合物表达与纯化 | 第31页 |
| 2.5.3 硒代蛋白的表达与纯化 | 第31-32页 |
| 2.5.4 EsaG~(33-73)/Orf13/EsaH复合物表达与纯化 | 第32页 |
| 2.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第32页 |
| 2.6.1 SDS-PAGE | 第32页 |
| 2.6.2 Tricine-SDS-PAGE | 第32页 |
| 2.7 结晶条件筛选与晶体优化 | 第32-33页 |
| 2.7.1 结晶条件的初筛 | 第32-33页 |
| 2.7.2 晶体的优化 | 第33页 |
| 2.8 数据收集与结构解析 | 第33-34页 |
| 2.8.1 衍射数据收集 | 第33页 |
| 2.8.2 数据处理 | 第33页 |
| 2.8.3 结构解析 | 第33-34页 |
| 3 实验结果 | 第34-51页 |
| 3.1 生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 3.1.1 结构域分析 | 第34页 |
| 3.1.2 二级结构预测 | 第34-35页 |
| 3.2 酵母双杂交 | 第35-36页 |
| 3.3 蛋白表达纯化 | 第36-41页 |
| 3.3.1 融合蛋白表达纯化 | 第36-37页 |
| 3.3.2 Orf13/EsaH表达纯化 | 第37-39页 |
| 3.3.3 EsaG/Orf13/EsaH复合物表达纯化 | 第39-41页 |
| 3.4 结晶条件筛选与晶体优化 | 第41-43页 |
| 3.4.1 Orf13/EsaH复合物结晶条件筛选与晶体优化 | 第41-42页 |
| 3.4.2 EsaG/Orf13/EsaH复合物结晶条件筛选与晶体优化 | 第42-43页 |
| 3.5 衍射数据收集与处理 | 第43-44页 |
| 3.6 晶体结构解析与修正 | 第44-45页 |
| 3.6.1 晶胞内容分析 | 第44页 |
| 3.6.2 晶体结构解析 | 第44-45页 |
| 3.7 Orf13/EsaH复合物晶体结构 | 第45-47页 |
| 3.8 EsaG/Orf13/EsaH复合物晶体结构 | 第47-51页 |
| 4 讨论 | 第51-55页 |
| 4.1 酵母双杂交实验结果讨论 | 第51页 |
| 4.2 EsaH的生物学功能 | 第51-52页 |
| 4.3 EsaG~(33-54)是否在晶体中 | 第52-54页 |
| 4.4 潜在的药物设计价值 | 第54页 |
| 4.5 研究展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 附录Ⅰ 溶液配制 | 第62-65页 |
| 附录Ⅱ 分子克隆反应体系 | 第65-66页 |
| 附录Ⅲ 数据收集与结构修正统计信息 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
