| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第14-23页 |
| 1.1 蓝舌病概况 | 第14-15页 |
| 1.2 蓝舌病毒 | 第15-18页 |
| 1.2.1 蓝舌病毒形态和基因组结构 | 第15-18页 |
| 1.2.2 蓝舌病毒复制周期 | 第18页 |
| 1.3 microRNA概述 | 第18-21页 |
| 1.3.1 miRNA生物起源 | 第18-20页 |
| 1.3.2 miRNA作用机制 | 第20页 |
| 1.3.3 miRNA研究方法-高通量测序技术 | 第20-21页 |
| 1.4 细胞miRNA与病原相互作用的研究 | 第21-22页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 第二章 蓝舌病毒感染A. albopictus细胞miRNA表达谱的鉴定 | 第23-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 细胞与病毒 | 第23页 |
| 2.1.2 主要实验试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-31页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第24页 |
| 2.2.2 BTV感染A.albopictus细胞的收集和总RNA提取 | 第24-25页 |
| 2.2.3 RT-PCR和噬斑试验 | 第25-26页 |
| 2.2.4 高通量测序 | 第26-27页 |
| 2.2.5 测序数据分析 | 第27-28页 |
| 2.2.6 miRNA分析 | 第28页 |
| 2.2.7 miRNA靶基因预测 | 第28页 |
| 2.2.8 实时定量PCR验证miRNA及其靶基因 | 第28-31页 |
| 2.2.9 miRNA靶基因的GO和KEGG分析 | 第31页 |
| 2.3 结果 | 第31-43页 |
| 2.3.1 BTV在A.albopictus细胞中的增殖特性 | 第31-33页 |
| 2.3.2 测序数据分析 | 第33-34页 |
| 2.3.3 已知miRNA的鉴定和差异表达分析 | 第34-36页 |
| 2.3.4 新miRNA的预测和差异表达分析 | 第36-40页 |
| 2.3.5 miRNA靶基因的GO及KEGG分析 | 第40-41页 |
| 2.3.6 实时定量PCR验证miRNA及其对应靶基因 | 第41-43页 |
| 2.4 讨论 | 第43-44页 |
| 第三章 蓝舌病毒感染PST细胞miRNA表达谱的鉴定 | 第44-58页 |
| 3.1 实验材料 | 第44页 |
| 3.1.1 细胞、病毒和抗体 | 第44页 |
| 3.1.2 主要实验试剂与仪器设备 | 第44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-47页 |
| 3.2.1 PST细胞的制备与培养 | 第44-45页 |
| 3.2.2 细胞免疫荧光试验 | 第45页 |
| 3.2.3 BTV感染PST细胞的收集和RNA提取 | 第45页 |
| 3.2.4 RT-PCR和噬斑试验 | 第45页 |
| 3.2.5 测序样品收集 | 第45-46页 |
| 3.2.6 高通量测序 | 第46页 |
| 3.2.7 生物信息学分析 | 第46页 |
| 3.2.8 新miRNA和对应靶基因的预测 | 第46页 |
| 3.2.9 miRNA差异分析 | 第46页 |
| 3.2.10 GO功能和KEGG路径分析 | 第46-47页 |
| 3.2.11 实时定量PCR验证mi RNA | 第47页 |
| 3.3 结果 | 第47-56页 |
| 3.3.1 BTV在PST细胞中的生长增殖特性 | 第47-49页 |
| 3.3.2 测序数据分析 | 第49-51页 |
| 3.3.3 显著差异表达miRNA分析 | 第51-55页 |
| 3.3.4 miRNA靶基因分析 | 第55页 |
| 3.3.5 GO功能和KEGG路径分析 | 第55-56页 |
| 3.3.6 实时定量PCR验证显著差异表达miRNA | 第56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 蓝舌病毒感染细胞后3个细胞miRNA功能初步研究 | 第58-71页 |
| 4.1 实验材料 | 第58页 |
| 4.1.1 细胞与病毒 | 第58页 |
| 4.1.2 主要实验试剂 | 第58页 |
| 4.2 实验方法 | 第58-62页 |
| 4.2.1 miRNA模拟体和抑制剂的设计与合成 | 第58-59页 |
| 4.2.2 siRNA的设计与合成 | 第59-60页 |
| 4.2.3 PST细胞转染miRNA最佳条件摸索 | 第60页 |
| 4.2.4 A.albopictus细胞转染miRNA和siRNA最佳条件摸索 | 第60页 |
| 4.2.5 转染实验 | 第60-61页 |
| 4.2.6 转染样品收集及RNA提取 | 第61页 |
| 4.2.7 实时定量PCR和噬斑试验验证miRNA和靶标基因对BTV复制的调节作用 | 第61-62页 |
| 4.3 结果 | 第62-69页 |
| 4.3.1 miRNA和siRNA转染实验最佳条件的确定 | 第62-64页 |
| 4.3.2 Novel-mir-105抑制BTV在PST细胞中复制 | 第64-65页 |
| 4.3.3 Aae-miR18895p和aae-miR29405p均促进BTV在A.albopictus细胞中复制 | 第65-68页 |
| 4.3.4 靶标基因AAEL012723和AAEL018190表达量下调抑制BTV在A.albopictus细胞中复制 | 第68-69页 |
| 4.4 讨论 | 第69-71页 |
| 第五章 全文结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 作者简历 | 第80页 |
