| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-9页 |
| 第一部分 一种外切 α-1,4-糖苷酶的酶学表征 | 第17-43页 |
| 第1章 绪论 | 第17-22页 |
| 1.1 淀粉与淀粉酶 | 第17页 |
| 1.2 淀粉酶的分类 | 第17-18页 |
| 1.3 α-葡萄糖苷酶的特性 | 第18-20页 |
| 1.3.1 α-葡萄糖苷酶的理化性质 | 第18页 |
| 1.3.2 α-葡萄糖苷酶的结构特征 | 第18-19页 |
| 1.3.3 α-葡萄糖苷酶的催化机制 | 第19-20页 |
| 1.4 α-葡萄糖苷酶 | 第20-21页 |
| 1.4.1 α-葡萄糖苷酶的研究概述 | 第20页 |
| 1.4.2 α-葡萄糖苷酶的实际应用 | 第20-21页 |
| 1.4.2.1 α-葡萄糖苷酶在发酵工业中的应用 | 第20-21页 |
| 1.4.2.2 α-葡萄糖苷酶在食品加工行业中的应用 | 第21页 |
| 1.5 立题依据及研究意义 | 第21页 |
| 1.6 本部分的主要研究内容 | 第21-22页 |
| 第2章 外切 α-1,4-糖苷酶的克隆及酶学性质分析 | 第22-42页 |
| 2.1 材料与方法 | 第22-26页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1.1 质粒与菌株 | 第22页 |
| 2.1.1.2 培养基和抗生素使用浓度 | 第22页 |
| 2.1.1.3 PCR引物 | 第22页 |
| 2.1.1.4 酶和试剂 | 第22页 |
| 2.1.1.5 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.2 分子生物学操作 | 第23-24页 |
| 2.1.2.1 细菌基因组的提取 | 第23页 |
| 2.1.2.2 重组表达载体的构建 | 第23页 |
| 2.1.2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第23页 |
| 2.1.2.4 重组克隆子的验证 | 第23页 |
| 2.1.2.5 定点突变 | 第23-24页 |
| 2.1.3 蛋白质的生物信息学分析和生化分析 | 第24-26页 |
| 2.1.3.1 Amy112的二级结构分析 | 第24页 |
| 2.1.3.2 Amy112的进化分析 | 第24页 |
| 2.1.3.3 Amy112酶活测定方法 | 第24页 |
| 2.1.3.4 Amy112蛋白纯化 | 第24-25页 |
| 2.1.3.5 蛋白浓度测定方法和SDS-PAGE检测 | 第25页 |
| 2.1.3.6 温度对酶活性及稳定性的影响 | 第25页 |
| 2.1.3.7 pH对酶活性及稳定性的影响 | 第25页 |
| 2.1.3.8 金属离子和有机溶剂对酶活性的影响 | 第25页 |
| 2.1.3.9 动力学参数测定 | 第25-26页 |
| 2.1.3.10 底物特异性分析 | 第26页 |
| 2.1.3.11 Amy112对支链淀粉水解后的产物鉴定 | 第26页 |
| 2.1.3.12 转糖基活性鉴定 | 第26页 |
| 2.2 结果与分析 | 第26-40页 |
| 2.2.1 淀粉酶Amy112基因的挖掘 | 第26-27页 |
| 2.2.2 Amy112的氨基酸序列分析 | 第27-30页 |
| 2.2.2.1 氨基酸序列分析 | 第27-28页 |
| 2.2.2.2 Amy112保守序列区域分析 | 第28-30页 |
| 2.2.2.3 Amy112的聚类分析 | 第30页 |
| 2.2.3 重组表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.4 Amy112的异源表达及纯化 | 第31-33页 |
| 2.2.5 Amy112的酶学性质分析 | 第33-39页 |
| 2.2.5.1 Amy112的底物特异性 | 第33页 |
| 2.2.5.2 温度对Amy112活性及稳定性的影响 | 第33-34页 |
| 2.2.5.3 pH对Amy112活性及稳定性的影响 | 第34页 |
| 2.2.5.4 金属离子对Amy112活性的影响 | 第34-35页 |
| 2.2.5.5 Amy112的动力学参数 | 第35-36页 |
| 2.2.5.6 Amy112对不同糖苷键切割和形成的作用方式 | 第36-39页 |
| 2.2.5.7 Amy112转糖基活性鉴定 | 第39页 |
| 2.2.6 Amy112结构模拟以及定点突变和生化分析验证催化三联体 | 第39-40页 |
| 2.3 讨论 | 第40-42页 |
| 结论 | 第42-43页 |
| 第二部分 模式菌内源蛋白酶底物特异性研究 | 第43-59页 |
| 第1章 绪论 | 第43-46页 |
| 1.1 常见模式菌株的介绍 | 第43-44页 |
| 1.1.1 大肠杆菌 | 第43页 |
| 1.1.2 枯草芽孢杆菌 | 第43页 |
| 1.1.3 巴斯德毕赤酵母 | 第43-44页 |
| 1.2 蛋白酶 | 第44页 |
| 1.2.1 蛋白酶的分类 | 第44页 |
| 1.2.3 蛋白酶的特性 | 第44页 |
| 1.2.4 内源蛋白酶对外源蛋白表达的影响 | 第44页 |
| 1.5 立题依据及研究意义 | 第44-45页 |
| 1.6 本部分的研究内容 | 第45-46页 |
| 第2章 模式表达系统内源蛋白酶底物特异性分析 | 第46-58页 |
| 2.1 材料与方法 | 第46-49页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第46-47页 |
| 2.1.1.1 质粒与菌株 | 第46页 |
| 2.1.1.2 培养基和抗生素 | 第46-47页 |
| 2.1.1.3 PCR引物 | 第47页 |
| 2.1.1.4 酶和试剂 | 第47页 |
| 2.1.1.5 主要仪器 | 第47页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第47-49页 |
| 2.1.2.1 重组表达载体的制备 | 第47-48页 |
| 2.1.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第48页 |
| 2.1.2.3 重组克隆的验证 | 第48页 |
| 2.1.2.4 酿酒酵母EBY100化转感受态的制备及转化 | 第48页 |
| 2.1.2.5 酿酒酵母细胞的发酵诱导 | 第48页 |
| 2.1.2.6 荧光抗体标记检测 | 第48-49页 |
| 2.2 结果与分析 | 第49-56页 |
| 2.2.1 酿酒酵母表面展示内源蛋白酶底物序列相关载体的构建 | 第49-50页 |
| 2.2.2 枯草芽孢杆菌内源蛋白酶底物特异性分析 | 第50-53页 |
| 2.2.3 大肠杆菌内源蛋白酶底物特异性分析 | 第53-54页 |
| 2.2.4 毕赤酵母GS115内源蛋白酶底物特异性分析 | 第54-56页 |
| 2.3 讨论 | 第56-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
