| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 1 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 课题背景及意义 | 第9-10页 |
| 1.2 木霉菌的研究进展 | 第10-11页 |
| 1.2.1 木霉菌与病原菌互作 | 第10-11页 |
| 1.2.2 木霉菌与植物互作 | 第11页 |
| 1.3 真菌疏水蛋白的功能 | 第11-12页 |
| 1.4 巴斯德毕赤酵母（P. pastroris）表达系统 | 第12-13页 |
| 1.4.1 巴斯德毕赤酵母的优点 | 第12页 |
| 1.4.2 外源基因到酵母基因组方式 | 第12-13页 |
| 1.5 Tricine-SDS-PAGE | 第13-14页 |
| 1.6 课题来源及研究内容 | 第14-15页 |
| 1.6.1 课题来源 | 第14页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第14-15页 |
| 2 棘孢木霉疏水蛋白基因HFBII-4 的克隆与序列分析 | 第15-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第15页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第15页 |
| 2.1.2 供试试剂 | 第15页 |
| 2.1.3 供试培养基 | 第15页 |
| 2.1.4 供试仪器 | 第15页 |
| 2.2 实验方法 | 第15-18页 |
| 2.2.1 棘孢木霉ACCC30536菌株cDNA获取 | 第15-17页 |
| 2.2.2 棘孢木霉HFBII-4 基因的扩增 | 第17页 |
| 2.2.3 HFBII-4 基因的生物信息学分析 | 第17-18页 |
| 2.3 结果分析 | 第18-22页 |
| 2.3.1 棘孢木霉总RNA | 第18页 |
| 2.3.2 棘孢木霉HFBII-4 基因序列分析 | 第18-19页 |
| 2.3.3 棘孢木霉疏水蛋白基因HFBII-4 的生物信息学分析 | 第19-22页 |
| 2.4 关于HFBII-4 基因生物信息学分析的讨论 | 第22-23页 |
| 2.5 本章小结 | 第23-24页 |
| 3 棘孢木霉ACCC30536 HFBII-4 基因的真核表达 | 第24-36页 |
| 3.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 3.1.1 供试菌株及载体 | 第24页 |
| 3.1.2 供试试剂 | 第24页 |
| 3.1.3 供试培养基 | 第24页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第24-25页 |
| 3.2 研究方法 | 第25-31页 |
| 3.2.1 疏水蛋白HFBII-4 基因的扩增 | 第25-26页 |
| 3.2.2 pPIC9K质粒的提取 | 第26页 |
| 3.2.3 重组表达载体pPIC9K-HFBII-4 的构建 | 第26-27页 |
| 3.2.4 重组表达载体pPIC9K-HFBII-4 的检测 | 第27页 |
| 3.2.5 重组表达载体转化pPIC9K-HFBII-4 转化毕赤酵母GS115 | 第27-29页 |
| 3.2.6 酵母重组转化子的诱导表达（MUT+表型） | 第29页 |
| 3.2.7 重组蛋白的Tricine-SDS-PAGE电泳 | 第29-31页 |
| 3.3 实验结果 | 第31-34页 |
| 3.3.1 重组表达载体的pPIC9K-HFBII-4 的构建及检测 | 第31-32页 |
| 3.3.2 重组质粒pPIC9K-HFBII-4 转化毕赤酵母及筛选 | 第32-34页 |
| 3.3.3 酵母酵母重组转化菌株GS115-HFBII-4 的诱导表达 | 第34页 |
| 3.4 关于真核表达及小分子蛋白检测的讨论 | 第34-35页 |
| 3.5 本章小结 | 第35-36页 |
| 4 重组蛋白rHFBII的功能分析 | 第36-49页 |
| 4.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 4.1.1 供试菌株及载体 | 第36页 |
| 4.1.2 供试试剂 | 第36页 |
| 4.1.3 供试培养基 | 第36页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第36-37页 |
| 4.2 研究方法 | 第37-40页 |
| 4.2.1 重组蛋白对山新杨激素转导途径相关基因的影响 | 第37-40页 |
| 4.2.2 重组蛋白对山新杨酶活性、叶绿素及可溶性蛋白含量的影响 | 第40页 |
| 4.2.3 重组蛋白对山新杨细胞膜透性及活性氧含量的影响 | 第40页 |
| 4.2.4 重组蛋白诱导山新杨抗病能力检测 | 第40页 |
| 4.3 实验结果 | 第40-46页 |
| 4.3.1 重组蛋白对山新杨激素转导途径相关基因的影响 | 第40-43页 |
| 4.3.2 重组蛋白对山新杨酶活性、叶绿素及可溶性蛋白含量的影响 | 第43-45页 |
| 4.3.3 重组蛋白对山新杨细胞膜透性及活性氧含量的影响 | 第45页 |
| 4.3.4 重组蛋白诱导山新杨抗病能力检测 | 第45-46页 |
| 4.4 真核重组蛋白功能分析的讨论 | 第46-47页 |
| 4.4.1 信号传递基因表达规律 | 第46-47页 |
| 4.4.2 生理水平响应 | 第47页 |
| 4.5 本章小结 | 第47-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录 | 第56-57页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
