| 中文摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-35页 |
| 1.1 盐碱对植物的危害 | 第10-11页 |
| 1.2 植物耐盐机理 | 第11-17页 |
| 1.2.1 植物耐盐的形态适应机制 | 第11-12页 |
| 1.2.2 植物耐盐的生理与分子机制 | 第12-17页 |
| 1.3 耐盐植物新品种的培育 | 第17-23页 |
| 1.3.1 常规选择育种培育耐盐品种 | 第17-18页 |
| 1.3.2 杂交育种法培育耐盐品种 | 第18页 |
| 1.3.3 诱变技术培育耐盐植物新品种 | 第18-19页 |
| 1.3.4 利用基因工程培育耐盐品种 | 第19-23页 |
| 1.4 Na~+/H~+逆向转运蛋白研究进展 | 第23-29页 |
| 1.4.1 质膜Na~+/H~+逆向转运蛋白 | 第24-25页 |
| 1.4.2 液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白 | 第25-29页 |
| 1.4.3 SeNHX1 基因的克隆与特性 | 第29页 |
| 1.5 洋桔梗的研究进展 | 第29-32页 |
| 1.5.1 洋桔梗组织培养 | 第30-31页 |
| 1.5.2 洋桔梗基因工程 | 第31-32页 |
| 1.6 本研究的目的意义、研究内容、技术路线 | 第32-35页 |
| 1.6.1 研究的目的和意义 | 第32-33页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第33页 |
| 1.6.3 技术路线 | 第33-35页 |
| 第二章 酵母和植物表达载体的构建及验证 | 第35-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-39页 |
| 2.1.1 质粒、菌株、引物和目的基因 | 第35-36页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第36-37页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第37-38页 |
| 2.1.4 培养基 | 第38-39页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第39页 |
| 2.2 实验方法 | 第39-45页 |
| 2.2.1 质粒小规模提取法 | 第39-40页 |
| 2.2.2 PCR扩增反应 | 第40-41页 |
| 2.2.3 DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第41页 |
| 2.2.4 从琼脂糖中回收和纯化PCR产物 | 第41-42页 |
| 2.2.5 PCR纯化产物与T载体的重组 | 第42页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备与重组质粒转化 | 第42-43页 |
| 2.2.7 T重组载体转化子的α－互补现象检查 | 第43-44页 |
| 2.2.8 内切酶鉴定阳性克隆和限制酶消化DNA | 第44-45页 |
| 2.2.9 去磷酸化 | 第45页 |
| 2.2.10 DNA的连接反应 | 第45页 |
| 2.3 结果与分析 | 第45-54页 |
| 2.3.1 SeNHX1 和GFP基因的扩增 | 第45-46页 |
| 2.3.2 中间载体的构建与鉴定 | 第46-49页 |
| 2.3.3 酵母表达载体的构建与鉴定 | 第49-52页 |
| 2.3.4 植物表达载体pBin438-SeNHX1 的构建与鉴定 | 第52-54页 |
| 2.4 讨论 | 第54-57页 |
| 2.4.1 报告基因的应用和融合基因构建过程的注意点 | 第54页 |
| 2.4.2 植物表达载体的启动子 | 第54-55页 |
| 2.4.3 实验中遇到的问题 | 第55-57页 |
| 第三章 SeNHX1 在酵母中的功能及亚细胞的定位 | 第57-69页 |
| 3.1 实验材料 | 第57-59页 |
| 3.1.1 质粒、菌株和引物 | 第57页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第57页 |
| 3.1.3 试剂 | 第57-58页 |
| 3.1.4 培养基及主要溶液 | 第58-59页 |
| 3.2 实验方法 | 第59-61页 |
| 3.2.1 酿酒酵母感受态的制备 | 第59页 |
| 3.2.2 酵母细胞的转化方法 | 第59-60页 |
| 3.2.3 阳性克隆筛选 | 第60页 |
| 3.2.4 菌落PCR验证酵母阳性克隆 | 第60页 |
| 3.2.5 转化酵母的培养和荧光表达 | 第60页 |
| 3.2.6 缺陷型酵母 296H 耐盐性分析 | 第60-61页 |
| 3.2.7 酵母W303 转化子耐盐性分析 | 第61页 |
| 3.2.8 SeNHX1 亚细胞定位 | 第61页 |
| 3.3 结果与分析 | 第61-66页 |
| 3.3.1 酵母表达载体转化菌株W303 和 296H与阳性转化子鉴定 | 第61-62页 |
| 3.3.2 阳性转化子荧光表达 | 第62-63页 |
| 3.3.3 SeNHX1 部分恢复 296H Na~+的解毒功能 | 第63-64页 |
| 3.3.4 SeNHX1 提高酵母W303 的耐盐性 | 第64-66页 |
| 3.4 讨论 | 第66-68页 |
| 3.4.1 SeNHX1 和GFP融合基因的正确表达 | 第66页 |
| 3.4.2 SeNHX1 部分恢复nhx1 突变体酵母Na~+的解毒功能 | 第66-67页 |
| 3.4.3 SeNHX1 提高酵母W303 转化子的耐盐性 | 第67页 |
| 3.4.4 SeNHX1 表达蛋白定位于液泡膜 | 第67-68页 |
| 3.5 小结 | 第68-69页 |
| 第四章 SeNHX1 在烟草中表达及耐盐机制 | 第69-92页 |
| 4.1 实验材料 | 第69-70页 |
| 4.1.1 质粒、菌株和植物材料 | 第69页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第69页 |
| 4.1.3 试剂 | 第69-70页 |
| 4.1.4 培养基 | 第70页 |
| 4.2 实验方法 | 第70-78页 |
| 4.2.1 无菌苗扩繁 | 第70页 |
| 4.2.2 工程农杆菌的制备 | 第70-72页 |
| 4.2.3 烟草遗传转化 | 第72页 |
| 4.2.4 组培苗移栽 | 第72页 |
| 4.2.5 转基因苗检测 | 第72-78页 |
| 4.3 结果与分析 | 第78-88页 |
| 4.3.1 pBin438-SeNHX1 转化C58 农杆菌与PCR检测 | 第78页 |
| 4.3.2 转基因植物检测 | 第78-80页 |
| 4.3.3 转基因烟草离体耐盐性分析 | 第80-83页 |
| 4.3.4 盐胁迫下转基因烟草的生理响应 | 第83-88页 |
| 4.4 讨论 | 第88-91页 |
| 4.4.1 验证农杆菌的方法 | 第88-89页 |
| 4.4.2 烟草遗传转化中应注意的问题 | 第89页 |
| 4.4.3 SeNHX1 转基因烟草在盐胁迫下的生理响应 | 第89-91页 |
| 4.5 小结 | 第91-92页 |
| 第五章 耐盐洋桔梗新品种培育的初步研究 | 第92-108页 |
| 5.1 实验材料 | 第92-93页 |
| 5.1.1 植物材料与转化受体 | 第92页 |
| 5.1.2 质粒和菌株 | 第92页 |
| 5.1.3 培养基 | 第92-93页 |
| 5.2 实验方法 | 第93-95页 |
| 5.2.1 转化外植体的准备 | 第93页 |
| 5.2.2 侵染液的准备 | 第93页 |
| 5.2.3 外植体的侵染 | 第93-94页 |
| 5.2.4 共培养 | 第94页 |
| 5.2.5 脱菌筛选培养 | 第94页 |
| 5.2.6 抗性芽的伸长 | 第94页 |
| 5.2.7 抗性芽生根 | 第94页 |
| 5.2.8 抗性苗分子水平的检测 | 第94页 |
| 5.2.9 野生型洋桔梗对NaCl的抗性研究 | 第94-95页 |
| 5.2.10 转基因洋桔梗对NaCl的抗性 | 第95页 |
| 5.2.11 游离脯氨酸含量的测定 | 第95页 |
| 5.3 结果与分析 | 第95-104页 |
| 5.3.1 卡那霉素对野生型洋桔梗叶盘分化和小苗生长的影响 | 第95-97页 |
| 5.3.2 头孢霉素脱菌效果及对野生型洋桔梗叶盘分化的影响 | 第97页 |
| 5.3.3 野生型洋桔梗抗盐性 | 第97-99页 |
| 5.3.4 洋桔梗转基因程序及转基因抗性苗的获得 | 第99-101页 |
| 5.3.5 抗性苗生根 | 第101页 |
| 5.3.6 抗性苗分子检测 | 第101-102页 |
| 5.3.7 转基因洋桔梗试管苗耐盐性分析 | 第102页 |
| 5.3.8 转基因洋桔梗在盐胁迫中的脯氨酸响应 | 第102-103页 |
| 5.3.9 转基因苗扩繁 | 第103页 |
| 5.3.10 转基因试管苗移栽管理 | 第103-104页 |
| 5.4 讨论 | 第104-106页 |
| 5.4.1 抗生素筛选转基因苗 | 第104-105页 |
| 5.4.2 转化条件优化 | 第105页 |
| 5.4.3 转基因洋桔梗的抗盐能力 | 第105-106页 |
| 5.4.4 洋桔梗畸形试管苗形成原因分析 | 第106页 |
| 5.4.5 洋桔梗试管苗生根 | 第106页 |
| 5.5 小结 | 第106-108页 |
| 第六章 结论与展望 | 第108-111页 |
| 6.1 研究总结 | 第108-109页 |
| 6.2 创新点 | 第109页 |
| 6.3 展望 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-118页 |
| 发表论文情况 | 第118-119页 |
| 致谢 | 第119页 |
