| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 1 文献综述 | 第9-13页 |
| 1.1 昆虫免疫 | 第9-10页 |
| 1.1.1 昆虫免疫的物理防线 | 第9页 |
| 1.1.2 昆虫天然免疫的识别机制 | 第9-10页 |
| 1.1.2.1 昆虫体液免疫 | 第9-10页 |
| 1.1.2.2 昆虫细胞免疫 | 第10页 |
| 1.2 蛋白激酶C受体1的结构和研究概况 | 第10-13页 |
| 2 引言 | 第13-16页 |
| 2.1 研究的目的和意义 | 第13页 |
| 2.2 研究内容 | 第13-15页 |
| 2.2.1 柞蚕蛋白激酶C受体1基因序列的测定 | 第13-14页 |
| 2.2.2 柞蚕蛋白激酶C受体1的原核表达、蛋白纯化以及抗体制备 | 第14页 |
| 2.2.3 柞蚕蛋白激酶C受体1的表达分析 | 第14-15页 |
| 2.3 技术路线图 | 第15-16页 |
| 3 材料与方法 | 第16-30页 |
| 3.1 实验材料 | 第16页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第16页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第16-19页 |
| 3.2.1 主要实验仪器 | 第16-17页 |
| 3.2.2 主要生化试剂 | 第17页 |
| 3.2.3 常用溶液的配制 | 第17-19页 |
| 3.3 实验方法 | 第19-30页 |
| 3.3.1 柞蚕蛋白激酶C受体1基因的克隆 | 第19-23页 |
| 3.3.1.1 柞蚕的饲养 | 第19页 |
| 3.3.1.2 柞蚕组织的收集 | 第19-20页 |
| 3.3.1.3 柞蚕总RNA的提取 | 第20页 |
| 3.3.1.4 提取总RNA的质量检测 | 第20页 |
| 3.3.1.5 第一链cDNA的合成 | 第20-21页 |
| 3.3.1.6 引物设计和PCR扩增 | 第21-22页 |
| 3.3.1.7 PCR产物的纯化 | 第22页 |
| 3.3.1.8 目的片段与pMD-19T连接和转化 | 第22-23页 |
| 3.3.2 柞蚕蛋白激酶C受体1的原核表达 | 第23-24页 |
| 3.3.2.1 质粒提取 | 第23页 |
| 3.3.2.2 目的片段和pET-28a的双酶切 | 第23-24页 |
| 3.3.2.3 连接目的基因和表达载体 | 第24页 |
| 3.3.2.4 重组蛋白的诱导表达 | 第24页 |
| 3.3.3 重组蛋白的检测 | 第24-25页 |
| 3.3.3.1 SDS-PAGE电泳检测 | 第24页 |
| 3.3.3.2 Western Blot分析 | 第24-25页 |
| 3.3.4 重组蛋白纯化 | 第25-26页 |
| 3.3.4.1 重组蛋白的可溶性分析 | 第25页 |
| 3.3.4.2 重组蛋白的纯化 | 第25-26页 |
| 3.3.5 多克隆抗体制备 | 第26-27页 |
| 3.3.5.1 蛋白定量 | 第26页 |
| 3.3.5.2 抗体制备 | 第26-27页 |
| 3.3.6 柞蚕RACK1的表达分析 | 第27-30页 |
| 3.3.6.1 柞蚕各组织总RNA的提取 | 第27页 |
| 3.3.6.2 柞蚕各组织总蛋白的提取 | 第27页 |
| 3.3.6.3 实时荧光定量PCR | 第27-28页 |
| 3.3.6.4 RACK1基因在柞蚕不同组织的表达分析 | 第28页 |
| 3.3.6.5 微生物刺激处理后RACK1基因的表达分析 | 第28-29页 |
| 3.3.6.6 Western Blot分析RACK1的表达情况 | 第29-30页 |
| 4 结果与分析 | 第30-46页 |
| 4.1 柞蚕总RNA的提取与检测 | 第30页 |
| 4.2 柞蚕RACK1基因序列的测定和分析 | 第30-31页 |
| 4.3 柞蚕RACK1与其他物种RACK1氨基酸多序列比对 | 第31-33页 |
| 4.4 对RACK1序列用生物信息学的方法进行分析 | 第33-35页 |
| 4.4.1 RACK1基因保守性分析 | 第33页 |
| 4.4.2 RACK1蛋白结构模型 | 第33-34页 |
| 4.4.3 RACK1亲水性和疏水性分析 | 第34页 |
| 4.4.4 柞蚕RACK1同其他物种RACK1基因的同源性分析 | 第34-35页 |
| 4.5 柞蚕RACK1基因的ORF扩增 | 第35-36页 |
| 4.6 原核表达载体的构建 | 第36-38页 |
| 4.6.1 RACK1基因的克隆鉴定 | 第36-37页 |
| 4.6.2 重组质粒双酶切鉴定 | 第37页 |
| 4.6.3 菌落PCR鉴定 | 第37-38页 |
| 4.7 重组蛋白RACK1的诱导表达及蛋白纯化 | 第38-39页 |
| 4.7.1 重组蛋白SDS-PAGE检测 | 第38页 |
| 4.7.2 重组蛋白Western blotting检测 | 第38-39页 |
| 4.7.3 重组蛋白的纯化 | 第39页 |
| 4.8 多克隆抗体的制备 | 第39-40页 |
| 4.8.1 BCA法蛋白定量 | 第39-40页 |
| 4.8.2 ELISA检测 | 第40页 |
| 4.9 表达分析 | 第40-46页 |
| 4.9.1 RACK1时序表达分析 | 第40-41页 |
| 4.9.2 半定量分析RACK1在各组织中表达情况 | 第41页 |
| 4.9.3 荧光定量PCR和Western blotting分析RACK1在各组织中表达情况 | 第41-42页 |
| 4.9.4 免疫刺激后RACK1基因在柞蚕脂肪体及马氏管中的表达分析 | 第42-46页 |
| 5 讨论 | 第46-47页 |
| 6 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 个人简介 | 第54页 |
| 硕士期间成果 | 第54页 |
