| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| ·研究的目的和意义 | 第12页 |
| ·转基因抗病育种概述 | 第12-15页 |
| ·外源基因的导入方法 | 第13页 |
| ·转基因抗病育种的研究策略 | 第13-15页 |
| ·转基因抗病育种的展望 | 第15页 |
| ·核酶的国内外研究现状 | 第15-19页 |
| ·核酶在人类疾病治疗中的研究现状 | 第16-18页 |
| ·核酶在动物疾病治疗中的研究现状 | 第18页 |
| ·讨论 | 第18-19页 |
| ·研究内容和方法 | 第19-22页 |
| ·抗FMDV 核酶的设计方法 | 第19-20页 |
| ·抗FMDV 核酶表达载体的选择及构建 | 第20-21页 |
| ·表达抗FMDV 核酶阳性细胞株的筛选方法 | 第21-22页 |
| 第二章 抗FMDV 核酶的设计及体外活性检测 | 第22-42页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·病毒 | 第22页 |
| ·细胞 | 第22页 |
| ·菌株与载体 | 第22页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第22-23页 |
| ·试剂配制 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·试验方法 | 第24-31页 |
| ·O 型FMDV 的复苏与检测 | 第24-25页 |
| ·FMDV 的2B、3D 基因片段的RT-PCR 引物设计 | 第25页 |
| ·抗FMDV 核酶的设计及合成 | 第25页 |
| ·FMDV 总RNA 的提取 | 第25-26页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第26页 |
| ·目的DNA 片段的纯化回收 | 第26页 |
| ·扩增片段与pMD19-T 载体的连接及转化 | 第26-27页 |
| ·扩增片段与pEGFP-N1 载体的连接及转化 | 第27-28页 |
| ·核酶与重组表达质粒共转染BHK-21 细胞 | 第28-30页 |
| ·流式细胞术 | 第30页 |
| ·核酶抑制FMDV 效果检测 | 第30-31页 |
| ·试验结果 | 第31-40页 |
| ·O 型FMDV 测定 | 第31页 |
| ·FMDV 2B、 3D 二级结构及核酶靶位的确定 | 第31-34页 |
| ·RT-PCR 扩增产物 | 第34页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定和PCR 鉴定 | 第34-36页 |
| ·转染BHK-21 细胞荧光强度对比 | 第36-38页 |
| ·流式细胞术结果 | 第38-39页 |
| ·核酶对FMDV 的抑制效果 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 表达抗FMDV 核酶的山羊成纤维细胞株的建立 | 第42-51页 |
| ·试验材料 | 第42-43页 |
| ·细胞 | 第42页 |
| ·载体 | 第42页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第42页 |
| ·试剂配制 | 第42-43页 |
| ·主要仪器设备 | 第43页 |
| ·试验方法 | 第43-45页 |
| ·构建抗FMDV 核酶的表达载体 | 第43页 |
| ·抗FMDV 核酶重组表达质粒转染GFC 细胞 | 第43-44页 |
| ·含抗 FMDV 核酶的阳性 GFC 细胞的 G418 筛选 | 第44-45页 |
| ·单克隆细胞的 RT-PCR 检测 | 第45页 |
| ·试验结果 | 第45-49页 |
| ·重组表达质粒转染 GFC 细胞 | 第45-46页 |
| ·G418 筛选 | 第46-48页 |
| ·RT-PCR 检测结果 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| ·单克隆细胞筛选效率的提高 | 第49页 |
| ·适合核酶的表达载体的选择 | 第49-51页 |
| 第四章 全文结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59页 |
