| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 1 引言 | 第11-13页 |
| 2 试验材料 | 第13-16页 |
| ·主要仪器设备 | 第13页 |
| ·植物与真菌 | 第13页 |
| ·供试幼苗的培养与接种 | 第13页 |
| ·质粒和菌株 | 第13-14页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第14页 |
| ·实验涉及的培养基 | 第14-16页 |
| 3 试验方法 | 第16-27页 |
| ·pGBKT7-CaM 载体构建 | 第16-20页 |
| ·总RNA 的提取 | 第16页 |
| ·总 RNA 浓度、纯度及完整性检测 | 第16页 |
| ·cDNA 的合成 | 第16-17页 |
| ·PCR 扩增检测 | 第17-18页 |
| ·PCR 扩增产物的凝胶回收 | 第18页 |
| ·PCR 产物的载体连接反应 | 第18页 |
| ·CaC12 法制备大肠杆菌E.coli DH5α的感受态细胞 | 第18-19页 |
| ·连接产物的转化 | 第19页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第19页 |
| ·载体质粒的提取 | 第19-20页 |
| ·质粒双酶切 | 第20页 |
| ·目的基因片段与诱饵表达载体的连接转化 | 第20页 |
| ·转化子双酶切鉴定 | 第20页 |
| ·诱饵质粒转化到酵母AH109 | 第20-21页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第20-21页 |
| ·诱饵质粒的转化 | 第21页 |
| ·受叶锈菌侵染的小麦叶片酵母双杂交cDNA 文库的筛选 | 第21-23页 |
| ·酵母双杂交cDNA 文库筛选 | 第21-22页 |
| ·阳性克隆的重复验证 | 第22页 |
| ·计算交配效率 | 第22页 |
| ·PCR 法排除重复的文库质粒 | 第22页 |
| ·酵母质粒的提取 | 第22-23页 |
| ·一对一酵母双杂交验证阳性克隆与CaM 互做 | 第23页 |
| ·文库质粒的测序和比对 | 第23页 |
| ·筛选获得的互做蛋白与CaM 亚型相互作用的特异性分析 | 第23页 |
| ·多肽链合成 | 第23-24页 |
| ·电泳迁移率变动分析 | 第23页 |
| ·电泳迁移率变动分析 | 第23-24页 |
| ·双分子荧光互补实验 | 第24-25页 |
| ·基因表达的RT-PCR 检测 | 第25-27页 |
| 4 试验结果与分析 | 第27-43页 |
| ·TaCaM2-3 与TaCaM4-1 酵母双杂交诱饵质粒的构建及鉴定 | 第27-30页 |
| ·总 RNA 浓度、纯度及完整性检测 | 第27-28页 |
| ·RT-PCR 扩增TaCaM2-3 和Ta CaM4-1 基因 | 第28页 |
| ·重组质粒pMD19-T-CaM 构建与酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的测序结果及比对分析 | 第29页 |
| ·重组诱饵质粒pGBKT7-TaCaM 的酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·酵母转化及自激活鉴定 | 第30-31页 |
| ·毒性鉴定 | 第31页 |
| ·受叶锈菌侵染的小麦叶片酵母双杂交cDNA 文库的筛选 | 第31-35页 |
| ·文库的初步筛选 | 第31-33页 |
| ·利用PCR 对阳性克隆文库的二次筛选 | 第33-34页 |
| ·一对一酵母双杂交验证阳性克隆与CaM 互做 | 第34页 |
| ·阳性克隆序列分析 | 第34-35页 |
| ·筛选获得的互做蛋白与CaM 亚型相互作用的特异性分析 | 第35-36页 |
| ·TaCAMTA-like 蛋白的序列分析及其与CaM 结合位点的确定 | 第36-40页 |
| ·双分子荧光互补技术（BiFC）验证TaCAMTA-like 蛋白和CaM 在烟草中的相互作用 | 第40-42页 |
| ·TaCAMTA-like 在小麦受叶锈菌侵染过程中的表达特征分析 | 第42-43页 |
| 5 讨论 | 第43-50页 |
| ·Ca~(2+)/CaM 参与植物防卫反应 | 第43-46页 |
| ·Ca~(2+)/CaM 参与了小麦抵抗叶锈菌侵染的信号转导过程 | 第43-44页 |
| ·植物钙调素亚型的生物学功能 | 第44-46页 |
| ·钙调素结合蛋白参与植物抗逆防卫反应过程 | 第46-48页 |
| ·研究蛋白质相互作用的实验技术 | 第46-47页 |
| ·钙调素结合蛋白参与小麦抗叶锈侵染过程 | 第47-48页 |
| ·展望 | 第48-50页 |
| 6 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第56-57页 |
| 作者简历 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
