| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 中文文摘 | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 绪论 | 第10-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-28页 |
| 1.1 稻瘟病概述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 稻瘟病及稻瘟菌 | 第12页 |
| 1.1.2 稻瘟菌的侵染过程 | 第12-13页 |
| 1.2 稻瘟菌效应蛋白研究的进展及几种重要效应蛋白 | 第13-20页 |
| 1.2.1 效应蛋白的特征和分类 | 第13-14页 |
| 1.2.2 稻瘟菌效应蛋白基因组的研究 | 第14-15页 |
| 1.2.3 稻瘟菌抗性基因及无毒基因的鉴定和克隆 | 第15-20页 |
| 1.3 效应蛋白致病性机制的研究 | 第20-24页 |
| 1.3.1 效应蛋白的转运机制 | 第20-22页 |
| 1.3.2 诱导植物细胞死亡的效应蛋白 | 第22-23页 |
| 1.3.3 抑制水稻PTI的效应蛋白 | 第23-24页 |
| 1.4 鉴定效应蛋白的主要策略 | 第24-25页 |
| 1.4.1 图位克隆策略 | 第24页 |
| 1.4.2 异源表达策略 | 第24-25页 |
| 1.4.3 效应蛋白分子机制的探究策略 | 第25页 |
| 1.5 存在问题及展望 | 第25-26页 |
| 1.6 本课题的研究内容和技术路线 | 第26-28页 |
| 第2章 利用烟草瞬时表达系统筛选稻瘟菌效应蛋白 | 第28-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第28页 |
| 2.1.1 植物材料、菌种、质粒 | 第28页 |
| 2.1.2 实验试剂和主要仪器 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-29页 |
| 2.2.1 构建稻瘟菌效应蛋白pGD-M表达载体 | 第28-29页 |
| 2.2.3 pGD-M表达载体导入农杆菌GV3101 | 第29页 |
| 2.2.4 烟草植株的培养及获得 | 第29页 |
| 2.2.5 农杆菌侵染液的制备 | 第29页 |
| 2.2.6 烟草注射筛选效应蛋白 | 第29页 |
| 2.2.7 烟草叶片的DAB组织化学染色鉴定 | 第29页 |
| 2.3 结果与分析 | 第29-35页 |
| 2.3.1 植物表达载体pGD-M的构建及酶切鉴定 | 第29-32页 |
| 2.3.2 农杆菌GV3101转化子的鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.3 烟草瞬时表达筛选稻瘟菌效应蛋白及DAB染色 | 第33-35页 |
| 2.4 小结 | 第35-38页 |
| 第3章 诱导细胞死亡稻瘟菌效应蛋白功能初步研究 | 第38-60页 |
| 3.1 实验材料 | 第38页 |
| 3.1.1 植物材料、菌种、质粒 | 第38页 |
| 3.1.2 实验试剂和主要仪器 | 第38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-42页 |
| 3.2.1 新型效应蛋白MoCdiEP1-9的生物信息学分析 | 第38-39页 |
| 3.2.2 pGD-NS-MoCdiEPs表达载体的设计和构建 | 第39-40页 |
| 3.2.3 效应因白信号肽对诱导细胞死亡活性影响的检测 | 第40页 |
| 3.2.4 pGD-DM-MoCdiEPs表达载体的设计和构建 | 第40页 |
| 3.2.5 效应蛋白结构域对诱导细胞死亡活性的影响分析 | 第40页 |
| 3.2.6 通用表达载体pC-sGFP的设计和构建 | 第40-41页 |
| 3.2.7 植物表达载体pC-sGFP-MoCdiEPs的设计和构建 | 第41-42页 |
| 3.2.8 烟草细胞中绿色荧光蛋白的检测 | 第42页 |
| 3.3 结果与分析 | 第42-58页 |
| 3.3.1 稻瘟菌效应蛋白序列及结构的生物信息学分析 | 第42-51页 |
| 3.3.2 稻瘟菌效应蛋白基因信号肽序列功能鉴定 | 第51-54页 |
| 3.3.3 稻瘟菌效应蛋白基因保守结构基序功能初步研究 | 第54-56页 |
| 3.3.4 稻瘟菌效应蛋白亚细胞定位功能初探 | 第56-58页 |
| 3.4 小结 | 第58-60页 |
| 第4章 稻瘟菌效应蛋白基因植物稳定表达载体构建及转基因植株培育 | 第60-70页 |
| 4.1 实验材料 | 第60页 |
| 4.1.1 植物材料、菌种、质粒 | 第60页 |
| 4.1.2 实验试剂和主要仪器 | 第60页 |
| 4.2 实验方法 | 第60-62页 |
| 4.2.1 目的基因的PCR扩增克隆 | 第60页 |
| 4.2.2 pCXUN-GUS~+融合载体的构建 | 第60-61页 |
| 4.2.3 pCXUN-GUS~+-NM载体的构建及鉴定 | 第61-62页 |
| 4.2.4 DNA序列的测定和分析 | 第62页 |
| 4.2.5 农杆菌介导转化 | 第62页 |
| 4.2.6 转基因水稻植株系的获得及GUS活性初步检测 | 第62页 |
| 4.3 结果与分析 | 第62-68页 |
| 4.3.1 生物信息学方法分析预测基因 | 第62-65页 |
| 4.3.2 植物表达载体pCXUN-GUS~+-NM融合载体的构建及酶切鉴定 | 第65-66页 |
| 4.3.3 农杆菌转化子的鉴定 | 第66-67页 |
| 4.3.4 水稻转基因稳定表达植株的获得及GUS活性检测 | 第67-68页 |
| 4.4 小结 | 第68页 |
| 4.5 后续工作 | 第68-70页 |
| 第5章 讨论 | 第70-74页 |
| 5.1 稻瘟菌效应蛋白研究的意义 | 第70页 |
| 5.2 诱导植物细胞坏死新型稻瘟菌效应蛋白的筛选 | 第70页 |
| 5.3 9个新型稻瘟菌效应蛋白功能的初步鉴定 | 第70-72页 |
| 后续工作 | 第72-74页 |
| 附录1 | 第74-76页 |
| 附录2 | 第76-80页 |
| 附录3 | 第80-86页 |
| 参考文献 | 第86-96页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第96-98页 |
| 致谢 | 第98-100页 |
| 个人简历 | 第100-102页 |
