| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第11-17页 |
| 1.1 植物适应低磷胁迫机制的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2 植物耐铝毒机制的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.3 WRKY转录因子家族调控植物适应低磷胁迫和铝毒害的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-32页 |
| 2.1 本研究总体技术路线 | 第17-18页 |
| 2.2 实验材料 | 第18-24页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第18页 |
| 2.2.2 载体和菌株 | 第18-21页 |
| 2.2.3 培养基及配方 | 第21-22页 |
| 2.2.3.1 细菌培养基 | 第21页 |
| 2.2.3.2 酵母单杂所用培养基 | 第21页 |
| 2.2.3.3 MS培养基 | 第21-22页 |
| 2.2.3.4 瞬时表达所用培养基 | 第22页 |
| 2.2.4 主要试剂及配制 | 第22-24页 |
| 2.2.4.1 抗生素和激素配方 | 第22-23页 |
| 2.2.4.2 酵母转化配方 | 第23页 |
| 2.2.4.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第23页 |
| 2.2.4.5 DNA抽提主要试剂 | 第23页 |
| 2.2.4.6 RNA抽提主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.5 主要药品和试剂 | 第24页 |
| 2.3 主要设备 | 第24-25页 |
| 2.4 实验方法 | 第25-32页 |
| 2.4.1 GmWRKY基因的克隆和生物信息学分析 | 第25页 |
| 2.4.2 GmWRKY基因表达模式分析 | 第25-26页 |
| 2.4.2.1 营养元素缺乏对GmWRKY基因表达的影响 | 第25页 |
| 2.4.2.2 激素对大豆GmWRKY基因表达的影响 | 第25-26页 |
| 2.4.2.3 铝毒害对GmWRKY基因表达的影响 | 第26页 |
| 2.4.3 RNA的提取和反转录 | 第26-27页 |
| 2.4.3.1 植物组织基因组RNA的提取 | 第26页 |
| 2.4.3.2 植物组织基因组RNA的反转录 | 第26-27页 |
| 2.4.4 实时定量PCR及其引物设计 | 第27页 |
| 2.4.5 DNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.4.6 GmWRKY基因的表达载体构建 | 第28-29页 |
| 2.4.6.1 GmWRKYs的Gateway系统的载体构建 | 第28页 |
| 2.4.6.2 GmWRKYs的亚细胞定位载体pBEGFP构建 | 第28-29页 |
| 2.4.6.3 GmWRKYs和GmALMT1启动子的酵母单杂载体构建 | 第29页 |
| 2.4.7 大豆GmWRKY的亚细胞定位 | 第29-30页 |
| 2.4.7.1 瞬时表达转洋葱表皮细胞 | 第29-30页 |
| 2.4.7.2 瞬时表达转烟草表皮细胞 | 第30页 |
| 2.4.8 拟南芥的转化与后代筛选 | 第30-31页 |
| 2.4.9 拟南芥花青素含量测定 | 第31页 |
| 2.4.10 数据统计及分析 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-49页 |
| 3.1 大豆IIa型WRKY基因成员的生物信息学分析 | 第32-35页 |
| 3.1.1 大豆GmWRKY的进化树和结构域分析 | 第32-35页 |
| 3.2 大豆GmWRKY基因家族成员的生物学特性分析 | 第35-37页 |
| 3.2.1 大豆GmWRKY的转录激活活性分析 | 第35页 |
| 3.2.2 大豆GmWRKY的亚细胞定位分析 | 第35-37页 |
| 3.3 大豆GmWRKYs基因表达模式分析 | 第37-44页 |
| 3.3.1 营养元素的缺乏对大豆GmWRKYs基因表达模式的影响 | 第37-39页 |
| 3.3.2 部分激素处理对大豆GmWRKYs基因表达模式的影响 | 第39-41页 |
| 3.3.3 铝毒害对大豆GmWRKYs基因表达模式的影响 | 第41-44页 |
| 3.3.3.1 铝毒害调控大豆GmWRKYs基因的表达 | 第41-42页 |
| 3.3.3.2 铝调控的GmWRKYs表达的自然变异分析 | 第42-44页 |
| 3.4 大豆GmWRKY7的功能研究 | 第44-49页 |
| 3.4.1 大豆GmWRKY7与GmALMT1启动子相互作用的分析 | 第44-46页 |
| 3.4.2 GmALMT1与GmWRKY7响应铝毒害的表达模式分析 | 第46-49页 |
| 3.4.2.2 超量表达GmWRKY7对拟南芥响应低磷胁迫的影响 | 第46-49页 |
| 4 讨论与结论 | 第49-54页 |
| 4.1 大豆GmWRKY家族基因分析 | 第49-50页 |
| 4.2 大豆GmWRKYs的表达模式分析 | 第50-51页 |
| 4.3 GmWRKY与大豆铝毒适应性的关系 | 第51页 |
| 4.4 GmWRKY与大豆低磷适应性的关系 | 第51-52页 |
| 4.5 结论 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 附录 | 第61-62页 |
