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二硫键异构酶过表达对家蚕乙酰胆碱酯酶在毕赤酵母中表达的作用研究

摘要第3-5页
abstract第5-7页
英文缩略词表第8-12页
1 前言第12-25页
    1.1 乙酰胆碱酯酶第12-15页
        1.1.1 乙酰胆碱酯酶简介第12页
        1.1.2 乙酰胆碱酯酶的应用现状第12-14页
        1.1.3 重组乙酰胆碱酯酶的研究现状第14-15页
    1.2 毕赤酵母表达系统第15-19页
        1.2.1 毕赤酵母表达系统简介第15-16页
        1.2.2 毕赤酵母高效表达策略的研究进展第16-19页
    1.3 二硫键异构酶(PDI)第19-22页
        1.3.1 二硫键异构酶简介第19-20页
        1.3.2 二硫键异构酶在有助毕赤酵母高效表达外源蛋白中的研究进展第20-22页
    1.4 本研究课题的研究意义及研究内容第22-24页
    1.5 技术路线第24-25页
2 材料与方法第25-40页
    2.1 材料第25-30页
        2.1.1 菌种与载体第25页
        2.1.2 主要试剂第25-26页
        2.1.3 主要仪器第26-27页
        2.1.4 常用试剂的配制第27-29页
        2.1.5 PCR引物第29-30页
    2.2 实验方法第30-40页
        2.2.1 目的基因PDI的获得第30-31页
        2.2.2 重组载体p PICZαA-PDI的构建第31-33页
        2.2.3 重组菌株GS115/p PIC9K-bmace-opt/PDI的构建第33-34页
        2.2.4 重组子的筛选第34页
        2.2.5 分泌表达重组子的诱导表达第34-35页
        2.2.6 表达产物的SDS-PAGE分析第35-36页
        2.2.7 表达产物的Western blotting鉴定第36页
        2.2.8 表达产物的蛋白浓度和酶活力分析第36-37页
        2.2.9 GS115/p PIC9K-bmace-opt/PDI毕赤酵母工程菌表达条件的优化第37-38页
        2.2.10 重组Bm ACh E的敏感性分析第38-40页
3 结果与分析第40-55页
    3.1 二硫键异构酶基因PDI的获取及鉴定第40-41页
    3.2 表达载体p PICZαA-PDI的构建与鉴定第41-43页
    3.3 PDI共表达重组酶菌株GS115/p PIC9K-bmace-opt/PDI的构建、鉴定与筛选第43-44页
    3.4 PDI共表达重组酶菌株的诱导表达及鉴定第44-46页
    3.5 家蚕乙酰胆碱酯酶的活力与蛋白浓度分析第46-47页
    3.6 重组菌GS115/p PIC9K-bmace-opt/PDI表达条件的优化第47-52页
        3.6.1 诱导温度对GS115/p PIC9K-bmace-opt/PDI中Bm ACh E表达的影响第47-48页
        3.6.2 菌体密度对GS115/p PIC9K-bmace-opt/PDI中Bm ACh E表达的影响第48-49页
        3.6.3 甲醇浓度对GS115/p PIC9K-bmace-opt/PDI中Bm ACh E表达的影响第49-50页
        3.6.4 p H值对GS115/p PIC9K-bmace-opt/PDI中Bm ACh E表达的影响第50-51页
        3.6.5 最优条件下Bm ACh E的表达第51-52页
    3.7 家蚕乙酰胆碱酯酶的农药敏感性分析第52-55页
4 讨论与结论第55-61页
    4.1 讨论第55-58页
        4.1.1 重组菌GS115/p PIC9K-bmace-opt/PDI的构建第55-56页
        4.1.2 重组Bm ACh E的分泌表达第56-57页
        4.1.3 重组Bm ACh E的分泌表达的条件优化第57-58页
        4.1.4 重组Bm ACh E的农药敏感性分析第58页
    4.2 结论与展望第58-61页
        4.2.1 结论第58-59页
        4.2.2 创新点第59页
        4.2.3 展望第59-61页
致谢第61-62页
参考文献第62-67页
附录第67页

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