| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-7页 |
| 英文缩略词表 | 第8-12页 |
| 1 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 乙酰胆碱酯酶 | 第12-15页 |
| 1.1.1 乙酰胆碱酯酶简介 | 第12页 |
| 1.1.2 乙酰胆碱酯酶的应用现状 | 第12-14页 |
| 1.1.3 重组乙酰胆碱酯酶的研究现状 | 第14-15页 |
| 1.2 毕赤酵母表达系统 | 第15-19页 |
| 1.2.1 毕赤酵母表达系统简介 | 第15-16页 |
| 1.2.2 毕赤酵母高效表达策略的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.3 二硫键异构酶（PDI） | 第19-22页 |
| 1.3.1 二硫键异构酶简介 | 第19-20页 |
| 1.3.2 二硫键异构酶在有助毕赤酵母高效表达外源蛋白中的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.4 本研究课题的研究意义及研究内容 | 第22-24页 |
| 1.5 技术路线 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-40页 |
| 2.1 材料 | 第25-30页 |
| 2.1.1 菌种与载体 | 第25页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.4 常用试剂的配制 | 第27-29页 |
| 2.1.5 PCR引物 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-40页 |
| 2.2.1 目的基因PDI的获得 | 第30-31页 |
| 2.2.2 重组载体p PICZαA-PDI的构建 | 第31-33页 |
| 2.2.3 重组菌株GS115/p PIC9K-bmace-opt/PDI的构建 | 第33-34页 |
| 2.2.4 重组子的筛选 | 第34页 |
| 2.2.5 分泌表达重组子的诱导表达 | 第34-35页 |
| 2.2.6 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第35-36页 |
| 2.2.7 表达产物的Western blotting鉴定 | 第36页 |
| 2.2.8 表达产物的蛋白浓度和酶活力分析 | 第36-37页 |
| 2.2.9 GS115/p PIC9K-bmace-opt/PDI毕赤酵母工程菌表达条件的优化 | 第37-38页 |
| 2.2.10 重组Bm ACh E的敏感性分析 | 第38-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-55页 |
| 3.1 二硫键异构酶基因PDI的获取及鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2 表达载体p PICZαA-PDI的构建与鉴定 | 第41-43页 |
| 3.3 PDI共表达重组酶菌株GS115/p PIC9K-bmace-opt/PDI的构建、鉴定与筛选 | 第43-44页 |
| 3.4 PDI共表达重组酶菌株的诱导表达及鉴定 | 第44-46页 |
| 3.5 家蚕乙酰胆碱酯酶的活力与蛋白浓度分析 | 第46-47页 |
| 3.6 重组菌GS115/p PIC9K-bmace-opt/PDI表达条件的优化 | 第47-52页 |
| 3.6.1 诱导温度对GS115/p PIC9K-bmace-opt/PDI中Bm ACh E表达的影响 | 第47-48页 |
| 3.6.2 菌体密度对GS115/p PIC9K-bmace-opt/PDI中Bm ACh E表达的影响 | 第48-49页 |
| 3.6.3 甲醇浓度对GS115/p PIC9K-bmace-opt/PDI中Bm ACh E表达的影响 | 第49-50页 |
| 3.6.4 p H值对GS115/p PIC9K-bmace-opt/PDI中Bm ACh E表达的影响 | 第50-51页 |
| 3.6.5 最优条件下Bm ACh E的表达 | 第51-52页 |
| 3.7 家蚕乙酰胆碱酯酶的农药敏感性分析 | 第52-55页 |
| 4 讨论与结论 | 第55-61页 |
| 4.1 讨论 | 第55-58页 |
| 4.1.1 重组菌GS115/p PIC9K-bmace-opt/PDI的构建 | 第55-56页 |
| 4.1.2 重组Bm ACh E的分泌表达 | 第56-57页 |
| 4.1.3 重组Bm ACh E的分泌表达的条件优化 | 第57-58页 |
| 4.1.4 重组Bm ACh E的农药敏感性分析 | 第58页 |
| 4.2 结论与展望 | 第58-61页 |
| 4.2.1 结论 | 第58-59页 |
| 4.2.2 创新点 | 第59页 |
| 4.2.3 展望 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 附录 | 第67页 |
