| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-29页 |
| 1 雌激素受体ER和雄激素受体AR的研究进展 | 第14-24页 |
| 1.1 雌激素受体和雄激素受体的概述 | 第14-15页 |
| 1.2 雌激素受体和雄激素受体的分类 | 第15-16页 |
| 1.2.1 雌激素受体的分类 | 第15页 |
| 1.2.2 雄激素受体的分类 | 第15-16页 |
| 1.3 雌激素受体的结构和功能 | 第16-18页 |
| 1.3.1 A/B区 | 第16-17页 |
| 1.3.2 C区 | 第17页 |
| 1.3.3 D区 | 第17页 |
| 1.3.4 E/F区 | 第17-18页 |
| 1.4 雄激素受体的结构和功能 | 第18-20页 |
| 1.4.1 A/B域 | 第18页 |
| 1.4.2 C域 | 第18-19页 |
| 1.4.3 D域 | 第19页 |
| 1.4.4 E域 | 第19-20页 |
| 1.5 雌激素受体和雄激素受体的信号转导通路 | 第20-22页 |
| 1.5.1 雌激素受体的作用机制 | 第20-22页 |
| 1.5.1.1 依赖ERE的信号转导通路 | 第20页 |
| 1.5.1.2 不依赖ERE的基因组介导的ER信号通路 | 第20-21页 |
| 1.5.1.3 ER信号与其它信号转导连接的通路 | 第21页 |
| 1.5.1.4 非配体依赖型信号通路 | 第21-22页 |
| 1.5.2 雄激素受体的作用机制 | 第22页 |
| 1.6 雌激素受体和雄激素受体在硬骨鱼类中的表达模式 | 第22-24页 |
| 1.6.1 雌激素受体在硬骨鱼类中的表达模式 | 第22-23页 |
| 1.6.2 雄激素受体在硬骨鱼类中的表达模式 | 第23-24页 |
| 2 EDCs的危害 | 第24-27页 |
| 2.1 环境中EE2和MT的危害 | 第24-26页 |
| 2.2 EE2和MT分别与ERs和AR的关系 | 第26-27页 |
| 3 研究的目的和意义 | 第27-29页 |
| 3.1 选择EE2和MT的意义 | 第27页 |
| 3.2 选择兴国红鲤作为实验动物的意义 | 第27-29页 |
| 第二章 兴国红鲤雌激素受体ERα、ERβ、ERβ1 和ERβ2 和雄激素受体AR基因全长的克隆与表达 | 第29-53页 |
| 1 材料与试剂 | 第29-31页 |
| 1.1 主要仪器 | 第29-30页 |
| 1.2 主要试剂 | 第30-31页 |
| 1.2.1 试剂盒和试剂 | 第30页 |
| 1.2.2 自配试剂 | 第30-31页 |
| 1.3 试验用鱼及其组织样品 | 第31页 |
| 2 实验步骤 | 第31-41页 |
| 2.1 提取组织总RNA | 第31-32页 |
| 2.2 cDNA模板制备 | 第32-33页 |
| 2.2.1 合成第一链cDNA用于qRT-PCR | 第32-33页 |
| 2.2.2 SMART cDNA的合成 | 第33页 |
| 2.3 ERs和AR中间片段的克隆 | 第33-36页 |
| 2.3.1 引物的设计与合成 | 第33-35页 |
| 2.3.2 ERs保守区域的PCR扩增 | 第35-36页 |
| 2.4 ERs基因和AR基因cDNA末端序列的快速扩增 | 第36-38页 |
| 2.5 DNA片段的纯化回收 | 第38页 |
| 2.6 连接和转化反应 | 第38-39页 |
| 2.7 阳性克隆的筛选 | 第39-40页 |
| 2.8 测序及生物信息学分析 | 第40页 |
| 2.9 实时荧光定量法检测ERs和AR基因的组织表达 | 第40-41页 |
| 2.9.1 RT-PCR | 第40-41页 |
| 2.9.2 统计分析 | 第41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-51页 |
| 3.1 总RNA的提取 | 第41-42页 |
| 3.2 兴国红鲤雌激素受体ERs和AR基因cDNA全长的克隆 | 第42页 |
| 3.3 兴国红鲤ERs和AR氨基酸序列同源性比对及系统发生分析 | 第42-49页 |
| 3.4 兴国红鲤ERs和AR基因的组织表达结果 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| 4.1 兴国红鲤ERs几种亚型和AR基因的分析 | 第51页 |
| 4.2 兴国红鲤ERs和AR基因组织分布与其功能的关系 | 第51-52页 |
| 小结 | 第52-53页 |
| 第三章 EE2和MT对兴国红鲤幼鱼肝中ER及AR基因mRNA表达的影响 | 第53-61页 |
| 1 材料与方法 | 第53-54页 |
| 1.1 主要仪器 | 第53-54页 |
| 1.2 主要药品和试剂盒 | 第54页 |
| 1.3 试验用鱼 | 第54页 |
| 2 EE2和MT暴露试验 | 第54-60页 |
| 2.1 实验设计 | 第54-55页 |
| 2.1.1 实验管理 | 第55页 |
| 2.1.2 采样与测定方法 | 第55页 |
| 2.2 实验方法 | 第55-56页 |
| 2.2.1 总RNA的提取及反转录 | 第55页 |
| 2.2.2 实时定量PCR | 第55-56页 |
| 2.2.3 数据分析 | 第56页 |
| 2.3 结果与分析 | 第56-59页 |
| 2.3.1 EE2对ERα 表达的影响 | 第56页 |
| 2.3.2 EE2对ERβ 表达的影响 | 第56-57页 |
| 2.3.3 EE2对ERβ1 表达的影响 | 第57页 |
| 2.3.4 EE2对ERβ2 表达的影响 | 第57-58页 |
| 2.3.5 MT对AR表达的影响 | 第58页 |
| 2.3.6 MT对vtg表达的影响 | 第58-59页 |
| 2.4 讨论 | 第59-60页 |
| 2.4.1 EE2对兴国红鲤ERs基因表达的影响 | 第59页 |
| 2.4.2 MT对兴国红鲤AR和vtg基因表达的影响 | 第59-60页 |
| 小结 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-73页 |
| 附录一 | 第73-74页 |
| 附录二 | 第74-75页 |
| 附件 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
