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布鲁氏菌16M经ROS通路介导AIR抑制细胞自噬调控炎性小体的机制研究

中文摘要第6-8页
Abstract第8-9页
缩略语第12-14页
引言第14-16页
第一章 文献综述 布鲁氏菌致病的分子机制研究第16-25页
    1 布鲁氏菌的胞内生存机制第16-18页
        1.1 布鲁氏菌对宿主细胞的侵入过程第16-17页
        1.2 布鲁氏菌在胞内的生存与运输第17页
        1.3 布鲁氏菌在胞内的复制第17-18页
    2 布鲁氏菌与炎症反应第18-20页
        2.1 炎性小体第18-19页
        2.2 线粒体与炎性小体第19-20页
        2.3 炎性小体与布鲁氏菌感染第20页
    3 布鲁氏菌与自噬反应第20-22页
        3.1 细胞自噬的机制第20-21页
        3.2 线粒体调控细胞自噬第21-22页
        3.3“分子刹车”p62蛋白可抑制炎症的发生第22页
        3.4 细胞自噬与布鲁氏菌感染第22页
    4 布鲁氏菌与凋亡反应第22-25页
        4.1 细胞自噬与凋亡第22-23页
        4.2 细胞凋亡机制第23页
        4.3 线粒体调控细胞凋亡第23-24页
        4.4 细胞凋亡与布鲁氏菌感染第24-25页
第二章 实验研究第25-103页
    实验一 AIR干扰、过表达和回复细胞系的构建与鉴定第25-42页
        1 材料与方法第25-36页
            1.1 材料第25-26页
            1.2 方法第26-36页
        2 结果第36-40页
            2.1 目的基因AIR的扩增与重组质粒的构建第36-37页
            2.2 细胞支原体检测第37页
            2.3 荧光显微镜观察慢病毒包装和感染效果第37-38页
            2.4 检测AIR基因在不同处理组细胞中的表达量第38-40页
        3 讨论第40-41页
            3.1 慢病毒载体的优势及对本实验的影响第40-41页
            3.2 慢病毒载体在疾病的预防和治疗中的作用第41页
        4 小结第41-42页
    实验二 初步探究AIR对布鲁氏菌感染引发炎症反应的影响第42-70页
        1 材料与方法第43-52页
            1.1 材料第43页
            1.2 方法第43-52页
        2 结果第52-68页
            2.1 布鲁氏菌的鉴定第52页
            2.2 16M侵染对各组细胞ROS产生水平的影响第52-54页
            2.3 MIito-ID? Red检测 16M侵染后线粒体的分布第54-56页
            2.4 电子显微镜观察线粒体分布情况第56-57页
            2.5 炎性相关基因Caspase-1、NLRP3、AIM2和ASC在基因水平的表达第57-64页
            2.6 ELISA检测 16M侵染后IL-1β、IL-18和Caspase-1 的表达量第64-66页
            2.7 NLRP3、Caspase-1 p10在蛋白水平上的表达第66-68页
        3 讨论第68-69页
            3.1 固有免疫与布鲁氏菌第68页
            3.2 固有免疫与ROS第68-69页
        4 小结第69-70页
    实验三 初步探究AIR对由布鲁氏菌感染引发的自噬的影响第70-88页
        1 材料与方法第70-73页
            1.1 材料第70-71页
            1.2 方法第71-73页
        2 结果第73-86页
            2.1 RAW264.7-LC3细胞系的验证第73-74页
            2.2 激光共聚焦显微镜检测LC3与线粒体共定位第74-78页
            2.3 透射电子显微镜观察自噬小体的形成第78-79页
            2.4 qRT-PCR在mRNA水平检测自噬相关因子的表达量第79-86页
            2.5 Western blot检测p62蛋白的表达水平第86页
        3 讨论第86-87页
            3.1 细胞自噬与布鲁氏菌感染第86页
            3.2 ROS与自噬第86-87页
        4 小结第87-88页
    实验四 初步探究AIR对布鲁氏菌感染引发凋亡的影响第88-103页
        1 材料与方法第88-91页
            1.1 材料第88-89页
            1.2 方法第89-91页
        2 结果第91-101页
            2.1 凋亡相关基因Bcl-2 和Bax在mRNA水平上的表达情况第91-96页
            2.2 激光共聚焦显微镜检测各组细胞凋亡第96页
            2.3 透射电子显微镜检测各组细胞的凋亡第96-97页
            2.4 流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率第97-100页
            2.5 Western blot检测 16M侵染对Caspase-3 蛋白表达量的影响第100-101页
        3 讨论第101-102页
            3.1 布鲁氏菌与凋亡第101页
            3.2 Bcl-2、ROS与自噬第101-102页
        4 小结第102-103页
全文总结第103-104页
创新点第104-105页
参考文献第105-111页
致谢第111-112页
作者简介第112-113页
石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表第113页

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