| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第7-11页 |
| 第一部分 文献综述 哺乳动物受精过程中生殖细胞相互作用 | 第11-22页 |
| 一、精子细胞的获能过程 | 第11-13页 |
| 1.1 胆固醇和膜流动性的改变 | 第12页 |
| 1.2 氧化还原反应的调节 | 第12页 |
| 1.3 酪氨酸的磷酸化作用 | 第12-13页 |
| 1.4 精子上识别透明带的受体 | 第13页 |
| 二、精子的顶体反应 | 第13-15页 |
| 2.1 顶体反应的诱发 | 第13-14页 |
| 2.2 顶体反应的分子机制 | 第14-15页 |
| 三、精卵细胞膜融合 | 第15-20页 |
| 3.1 精子上的重要分子蛋白 | 第15-18页 |
| 3.1.1 精子溶解酶样顶体蛋白SLLP1(Sperm Lyzozyme-Like Acrosomal Protein) | 第15页 |
| 3.1.2 精卵融合蛋白IZUMO1 | 第15-16页 |
| 3.1.3 整合素(integrin)以及受体 | 第16-17页 |
| 3.1.4 富含半胱氨酸的分泌蛋白(Cysteine-rich secretory protein,CRISP) | 第17页 |
| 3.1.5 赤道素蛋白(MN9抗原) | 第17页 |
| 3.1.6 睾丸特异性丝氨酸激酶TSSK6(testis specific serine kinase 6) | 第17页 |
| 3.1.7 精子赤道蛋白片段1(Sperm equatorial segment protein 1,SPESP1) | 第17-18页 |
| 3.2 卵细胞上重要蛋白 | 第18-20页 |
| 3.2.1 四次跨膜蛋白家族(tetraspan transmembrane protein) | 第18-19页 |
| 3.2.2 糖基磷脂酰肌醇(glycosyl phosphatidyl inositol,GPI)锚定蛋白 | 第19页 |
| 3.2.3 叶酸受体4(JUNO) | 第19-20页 |
| 四、相关实验方法 | 第20-21页 |
| 五、结语 | 第21-22页 |
| 第二部分 研究论文 | 第22-77页 |
| 一、绵羊精子赤道区蛋白1(Sperm equatorial segment protein,SPESP1)的cDNA克隆 | 第22-39页 |
| 前言 | 第22-24页 |
| 1.1 材料及方法 | 第24-28页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 1.1.2 实验方法 | 第25-28页 |
| 1.2 结果 | 第28-37页 |
| 1.2.1 绵羊睾丸组织总RNA的鉴定 | 第28页 |
| 1.2.2 绵羊睾丸组织合成cDNA的检测 | 第28-29页 |
| 1.2.3 绵羊Spesp1 cDNA序列克隆 | 第29-30页 |
| 1.2.4 测序结果与GenBank中序列结果对比分析 | 第30-32页 |
| 1.2.5 绵羊SPESP1的生物信息学分析 | 第32-37页 |
| 1.3 讨论 | 第37-39页 |
| 二、绵羊SPESP1的原核表达及其多克隆抗体制备 | 第39-57页 |
| 前言 | 第39-40页 |
| 2.1 材料及方法 | 第40-48页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第41-48页 |
| 2.2 结果 | 第48-55页 |
| 2.2.1 目的片段PCR结果以及原核表达重组载体pGE-Spesp1的鉴定 | 第48页 |
| 2.2.2 重组融合蛋白GST-SPESP1的原核表达 | 第48-52页 |
| 2.2.3 GST-SPESP1融合蛋白的纯化 | 第52页 |
| 2.2.4 纯化蛋白的浓度测定 | 第52-53页 |
| 2.2.5 纯化多克隆抗体特异性测定 | 第53-54页 |
| 2.2.6 抗体效价测定 | 第54-55页 |
| 2.3 讨论 | 第55-57页 |
| 三、绵羊睾丸组织以及精子中SPESP1蛋白的定位 | 第57-64页 |
| 前言 | 第57-58页 |
| 3.1 材料及方法 | 第58-61页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第58页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第58-61页 |
| 3.2 结果 | 第61-63页 |
| 3.2.1 SPESP1蛋白在绵羊睾丸组织中的定位 | 第61页 |
| 3.2.2 SPESP1蛋白在绵羊精子上的定位 | 第61-63页 |
| 3.3 讨论 | 第63-64页 |
| 四、绵羊SPESP1与精子的其它受精相关蛋白的相互作用 | 第64-77页 |
| 前言 | 第64-66页 |
| 4.1 材料及方法 | 第66-71页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第66-67页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第67-71页 |
| 4.2 结果 | 第71-75页 |
| 4.2.1 Spesp1、Izumo1、Izumo4以及Tssk6酵母片段PCR产物检测 | 第71页 |
| 4.2.2 Spesp1、Izumo1、Izumo4以及Tssk6酵母重组载体的鉴定 | 第71-72页 |
| 4.2.3 转化酵母的PCR鉴定 | 第72-73页 |
| 4.2.4 Y187和Y2H酵母双杂交结果 | 第73-75页 |
| 4.3 讨论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 攻读硕士期间参与的科研项目及发表的论文 | 第84页 |
