| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章绪论 | 第14-25页 |
| 1.1 过氧化物酶体增殖剂激活受体 Α（PPARΑ） | 第14-17页 |
| 1.1.1 PPARα 概论 | 第14-15页 |
| 1.1.2 PPARα 和肿瘤 | 第15-17页 |
| 1.2 E3泛素化连接酶 | 第17-21页 |
| 1.2.1 E3泛素化连接酶概论 | 第17-18页 |
| 1.2.2 指环结构域（RING）的一般特征 | 第18-19页 |
| 1.2.3 大多数指环结构域蛋白调节泛素的转移 | 第19-20页 |
| 1.2.4 鉴定E3泛素化连接酶是非常重要的 | 第20页 |
| 1.2.5 鉴定出E3泛素化连接酶的底物是非常重要的 | 第20-21页 |
| 1.3 B淋巴细胞瘤-2 基因（BCL2） | 第21-22页 |
| 1.3.1 Bcl2概论 | 第21-22页 |
| 1.3.2 Bcl2和肿瘤 | 第22页 |
| 1.4 本研究的意义 | 第22-23页 |
| 1.5 主要研究内容和技术路线 | 第23-25页 |
| 1.5.1 主要研究内容 | 第23-24页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章 PPARα 降低Bcl2蛋白水平 | 第25-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 实验细胞系以及质粒 | 第25页 |
| 2.1.2 实验仪器及实验耗材 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要实验试剂及其配制 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-36页 |
| 2.2.1 质粒扩增和提取 | 第27页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第27-28页 |
| 2.2.3 细胞转染 | 第28-29页 |
| 2.2.4 细胞加药物处理 | 第29页 |
| 2.2.5 细胞总蛋白提取 | 第29页 |
| 2.2.6 细胞质细胞核分离提取 | 第29-30页 |
| 2.2.7 细胞蛋白浓度的测定 | 第30-31页 |
| 2.2.8 蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测目标蛋白含量变化 | 第31-32页 |
| 2.2.9PPARα 对Bcl2基因水平的影响 | 第32-36页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第36-41页 |
| 2.3.1 PPARα 在不同细胞系中的表达 | 第36页 |
| 2.3.2 PPARα 基因沉默增加Bcl2蛋白水平 | 第36-37页 |
| 2.3.3 PPARα 基因沉默后，Bcl2的半衰期显著延长 | 第37页 |
| 2.3.4 过表达PPARα 显著降低内源性和外源性Bcl2蛋白水平 | 第37-38页 |
| 2.3.5 PARs家族中只有PPARα 降低Bcl2蛋白水平 | 第38页 |
| 2.3.6 PARα 对Bcl2的基因表达无影响 | 第38-39页 |
| 2.3.7 PPARα 依赖蛋白酶体信号降解Bcl2蛋白 | 第39页 |
| 2.3.8 PPARα 诱导Bcl2降解，缩短其半衰期 | 第39-40页 |
| 2.3.9 PPARα 激活剂对Bcl2蛋白水平基本无影响 | 第40-41页 |
| 2.4 本章小结 | 第41页 |
| 第三章 PPARα 作为泛素化连接酶诱导Bcl2泛素化降解 | 第41-54页 |
| 3.1 实验材料 | 第42页 |
| 3.1.1 实验细胞系和质粒 | 第42页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第42页 |
| 3.1.3 主要实验试剂及其配制 | 第42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-49页 |
| 3.2.1 质粒扩增和提取 | 第42-43页 |
| 3.2.2 构建PPARα/C102A点突变质粒 | 第43-45页 |
| 3.2.3 细胞培养与处理 | 第45页 |
| 3.2.4 细胞转染 | 第45-46页 |
| 3.2.5 细胞加药物处理 | 第46页 |
| 3.2.6 细胞总蛋白提取 | 第46页 |
| 3.2.7 变性免疫共沉淀 | 第46-47页 |
| 3.2.8 LC/MS/MS分析PPARα 诱导Bcl2泛素化位点 | 第47页 |
| 3.2.9 体外泛素化 | 第47-49页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第49-53页 |
| 3.3.1 PPARα 显著增加内源性和外源性Bcl2的泛素化 | 第49-50页 |
| 3.3.2 PPARα 沉默抑制Bcl2的泛素化 | 第50页 |
| 3.3.3 PPARα 蛋白结构中包含RING结构域 | 第50-51页 |
| 3.3.4 LC/MS/MS分析PPARα 诱导K48-连接的多聚泛素形成 | 第51-52页 |
| 3.3.5 PPARα 体外泛素化Bcl2 | 第52页 |
| 3.3.6 PPARα/C102A突变体对Bcl2蛋白的半衰期无影响 | 第52-53页 |
| 3.4 本章小结 | 第53-54页 |
| 第四章 PPARα 和Bcl2相互作用 | 第54-59页 |
| 4.1 实验材料 | 第54页 |
| 4.1.1 实验细胞系和实验所需质粒 | 第54页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第54页 |
| 4.1.3 主要实验试剂及其配制 | 第54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54-56页 |
| 4.2.1 质粒扩增和提取 | 第54-55页 |
| 4.2.2 细胞培养 | 第55页 |
| 4.2.3 细胞转染 | 第55页 |
| 4.2.4 细胞总蛋白提取 | 第55页 |
| 4.2.5 免疫共沉淀 | 第55-56页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第56-58页 |
| 4.3.1 PPARα 与Bcl2生理上相互绑定 | 第56-57页 |
| 4.3.2 PPARα 与Bcl2的BH3结构域相互绑定 | 第57页 |
| 4.3.3 PPARα/C102是PPARα 与Bcl2相互绑定的关键位点 | 第57-58页 |
| 4.4 本章小结 | 第58-59页 |
| 第五章 Bcl2的22位赖氨酸残基是泛素化关键位点 | 第59-64页 |
| 5.1 实验材料 | 第59页 |
| 5.1.1 实验细胞系和质粒 | 第59页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第59页 |
| 5.1.3 主要实验试剂及其配制 | 第59页 |
| 5.2 实验方法 | 第59-62页 |
| 5.2.1 质粒扩增和提取 | 第59-61页 |
| 5.2.2 细胞培养 | 第61页 |
| 5.2.3 细胞转染 | 第61页 |
| 5.2.4 细胞处理 | 第61-62页 |
| 5.2.5 细胞总蛋白提取 | 第62页 |
| 5.2.6 Western blot，免疫沉淀分析 | 第62页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第62-63页 |
| 5.3.1 PPARα 不能够泛素化降解Bcl2/K22R突变体 | 第62-63页 |
| 5.3.2 PPARα 对Bcl2/K22R突变体半衰期基本无影响 | 第63页 |
| 5.4 本章小结 | 第63-64页 |
| 第六章 PPARα/Bcl2信号增加肿瘤细胞对化疗药物敏感性 | 第64-74页 |
| 6.1 实验材料 | 第64-65页 |
| 6.1.1 实验细胞系和质粒 | 第64页 |
| 6.1.2 实验仪器 | 第64页 |
| 6.1.3 主要实验试剂及其配制 | 第64-65页 |
| 6.2 实验方法 | 第65-67页 |
| 6.2.1 质粒扩增和提取 | 第65页 |
| 6.2.2 细胞培养 | 第65页 |
| 6.2.3 细胞转染 | 第65-66页 |
| 6.2.4 筛选稳定表达细胞系 | 第66页 |
| 6.2.5 MTT法检测细胞存活率 | 第66页 |
| 6.2.6 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第66-67页 |
| 6.2.7 细胞总蛋白提取 | 第67页 |
| 6.2.8 Western blot分析 | 第67页 |
| 6.3 实验结果与分析 | 第67-72页 |
| 6.3.1 在化疗药物刺激下，PPARα 基因沉默增加细胞存活率 | 第67-68页 |
| 6.3.2 C102位点对PPARα 降低细胞存活率是十分关键的 | 第68-69页 |
| 6.3.3 在化疗药物刺激下， PPARα 激活下游凋亡信号 | 第69-70页 |
| 6.3.4 在化疗药物刺激下，PPARα 基因沉默降低细胞凋亡 | 第70-71页 |
| 6.3.5 C102位点是PPARα 诱导细胞凋亡的关键位点 | 第71-72页 |
| 6.4 本章小结 | 第72-74页 |
| 第七章 总结 | 第74-77页 |
| 7.1 PPARΑ 诱导BCL2蛋白水平的降低 | 第74-75页 |
| 7.2 PPARΑ 作为泛素化连接酶诱导BCL2泛素化降解 | 第75页 |
| 7.3 PPARΑ 和BCL2相互作用 | 第75页 |
| 7.4 BCL2的22位赖氨酸残基是PPARΑ 诱导BCL2泛素化的关键位点 | 第75-76页 |
| 7.5 PPARΑ/BCL2信号增加肿瘤细胞对化疗药物敏感性 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 在学期间的学术成果 | 第82-83页 |
| 参与课题 | 第83页 |
