| 摘要 | 第8-12页 |
| Abstract | 第12-16页 |
| 第1章 绪论 | 第17-45页 |
| 1.1 无乳链球菌研究进展 | 第17-31页 |
| 1.1.1 无乳链球菌的生物学特性 | 第17-18页 |
| 1.1.2 无乳链球菌的流行病学研究 | 第18-24页 |
| 1.1.3 无乳链球菌毒力因子研究进展 | 第24-27页 |
| 1.1.4 鱼类无乳链球菌病的防控手段 | 第27-31页 |
| 1.2 水产疫苗应用及研究进展 | 第31-43页 |
| 1.2.1 水产疫苗的发展历程 | 第32页 |
| 1.2.2 疫苗的种类 | 第32-38页 |
| 1.2.3 免疫方式 | 第38-40页 |
| 1.2.4 我国水产疫苗发展现状 | 第40-42页 |
| 1.2.5 水产疫苗存在的问题及发展展望 | 第42-43页 |
| 1.3 本研究目的与意义 | 第43-45页 |
| 第2章 三个细胞表面蛋白的重组截短表达与序列分析 | 第45-79页 |
| 2.1 材料和方法 | 第45-53页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和血清 | 第45页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器 | 第45-47页 |
| 2.1.3 主要溶液和试剂配制方法 | 第47-49页 |
| 2.1.4 基因组DNA的制备 | 第49页 |
| 2.1.5 B细胞抗原表位区的预测 | 第49-50页 |
| 2.1.6 PCR的引物设计 | 第50页 |
| 2.1.7 目的基因扩增 | 第50页 |
| 2.1.8 扩增产物的回收与重组表达载体的构建 | 第50页 |
| 2.1.9 重组载体的提取与鉴定 | 第50-51页 |
| 2.1.10 序列分析与比对 | 第51页 |
| 2.1.11 蛋白的表达与检测 | 第51-53页 |
| 2.2 结果 | 第53-73页 |
| 2.2.1 抗原表位区的预测 | 第53-59页 |
| 2.2.2 目的基因克隆 | 第59页 |
| 2.2.3 重组载体的构建与鉴定 | 第59-60页 |
| 2.2.4 蛋白序列分析 | 第60-72页 |
| 2.2.5 重组载体表达及其产物在大肠杆菌中存在形式分析 | 第72页 |
| 2.2.6 蛋白的纯化 | 第72-73页 |
| 2.2.7 蛋白的Western blotting检测 | 第73页 |
| 2.3 讨论 | 第73-78页 |
| 2.3.1 基因表达片段的选取 | 第73-74页 |
| 2.3.2 目的片段的表达与检测 | 第74-75页 |
| 2.3.3 蛋白的序列分析 | 第75-76页 |
| 2.3.4 蛋白序列在不同种属中的变异 | 第76-78页 |
| 2.4 小结 | 第78-79页 |
| 第3章 鱼源无乳链球菌CWSAP465、CWSAP1035和LIP342间接ELISA方法的建立 | 第79-91页 |
| 3.1 材料和方法 | 第79-81页 |
| 3.1.1 抗体和血清 | 第79页 |
| 3.1.2 工具酶及试剂盒 | 第79页 |
| 3.1.3 主要试剂及溶液配制方法 | 第79-80页 |
| 3.1.4 最适抗原包被浓度及最适血清稀释倍数 | 第80页 |
| 3.1.5 ELISA反应条件的优化 | 第80页 |
| 3.1.6 临界值的确定 | 第80-81页 |
| 3.1.7 特异性检验 | 第81页 |
| 3.1.8 重复性试验 | 第81页 |
| 3.2 结果 | 第81-87页 |
| 3.2.1 最适抗原包被浓度及最适血清稀释倍数 | 第81页 |
| 3.2.2 反应条件的优化 | 第81-84页 |
| 3.2.3 临界值的确定 | 第84-85页 |
| 3.2.4 特异性检验 | 第85页 |
| 3.2.5 重复性试验 | 第85-87页 |
| 3.3 讨论 | 第87-90页 |
| 3.3.1 鱼类抗体水平的评价 | 第87-88页 |
| 3.3.2 三个表面蛋白ELISA检测方法的建立 | 第88-90页 |
| 3.4 小结 | 第90-91页 |
| 第4章 三个重组蛋白对奥利亚罗非鱼和大菱鲆的免疫保护研究 | 第91-103页 |
| 4.1 材料和方法 | 第92-94页 |
| 4.1.1 菌株和抗体和主要试剂 | 第92页 |
| 4.1.2 实验动物 | 第92-93页 |
| 4.1.3 疫苗制备 | 第93页 |
| 4.1.4 疫苗无菌性及安全性检验 | 第93页 |
| 4.1.5 免疫与血清收集 | 第93-94页 |
| 4.1.6 攻毒保护试验 | 第94页 |
| 4.1.7 抗体检测 | 第94页 |
| 4.1.8 数据分析 | 第94页 |
| 4.2 结果 | 第94-100页 |
| 4.2.1 疫苗无菌性和安全性评价 | 第94-97页 |
| 4.2.2 抗体水平检测 | 第97页 |
| 4.2.3 攻毒保护试验 | 第97-100页 |
| 4.3 讨论 | 第100-102页 |
| 4.3.1 无乳链球菌表面蛋白及其免疫研究 | 第100页 |
| 4.3.2 三个蛋白的交叉保护能力 | 第100-101页 |
| 4.3.3 三个蛋白免疫效果的评价 | 第101-102页 |
| 4.4 小结 | 第102-103页 |
| 结论与展望 | 第103-105页 |
| 1 结论 | 第103页 |
| 2 展望 | 第103-105页 |
| 主要创新点 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-137页 |
| 致谢 | 第137-139页 |
| 发表论文及参加项目一览表 | 第139页 |
