| 缩写 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-12页 |
| Summary | 第12-16页 |
| 绪言 | 第17-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-34页 |
| 1.1 柠檬苦素类化合物的种类、分布和生物学活性 | 第18-19页 |
| 1.1.1 种类及分布 | 第18-19页 |
| 1.1.2 生物活性 | 第19页 |
| 1.2 柑橘类柠檬苦素的代谢途径 | 第19-25页 |
| 1.2.1 代谢途径 | 第21-24页 |
| 1.2.2 类柠檬苦素化合物与植物激素的关系 | 第24-25页 |
| 1.3 植物次生代谢产物生物合成的遗传调控 | 第25-34页 |
| 1.3.1 角鲨烯合成酶 | 第26-27页 |
| 1.3.2 氧化鲨烯环化酶 | 第27-28页 |
| 1.3.3 细胞色素P450 | 第28页 |
| 1.3.4 酰基转移酶 | 第28-29页 |
| 1.3.5 糖基转移酶 | 第29页 |
| 1.3.6 转录因子 | 第29-30页 |
| 1.3.7 转运蛋白 | 第30-31页 |
| 1.3.8 柠檬苦素生物合成相关的基因 | 第31-34页 |
| 第二章 柚类中柠檬苦素和诺米林的时空分布及遗传差异 | 第34-46页 |
| 2.1 材料 | 第34-35页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第34-35页 |
| 2.1.2 仪器设备及试剂 | 第35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-36页 |
| 2.2.1 类柠檬苦素化合物的提取和HPLC检测分析 | 第35页 |
| 2.2.2 HPLC方法验证 | 第35页 |
| 2.2.3 UPLC-MS/MS验证 | 第35-36页 |
| 2.2.4 数据分析 | 第36页 |
| 2.3 结果 | 第36-43页 |
| 2.3.1 HPLC和UPLC-MS/MS检测柠檬苦素和诺米林的含量 | 第36-38页 |
| 2.3.2 种子中的类柠檬苦素含量 | 第38-39页 |
| 2.3.3 柠檬苦素和诺米林含量在果实不同发育阶段中的动态变化 | 第39-43页 |
| 2.3.4 不同组织中的类柠檬苦素含量 | 第43页 |
| 2.4 讨论 | 第43-45页 |
| 2.4.1 12个柚子品种中的类柠檬苦素积累 | 第43-44页 |
| 2.4.2 果实发育过程中种子的类柠檬苦素含量的动态变化 | 第44页 |
| 2.4.3 低温对柠檬苦素和诺米林含量的影响 | 第44页 |
| 2.4.4 不同组织中类柠檬苦素的分布及转运 | 第44-45页 |
| 2.5 小结 | 第45-46页 |
| 第三章 类柠檬苦素生物合成相关基因的鉴定 | 第46-68页 |
| 3.1 材料 | 第46页 |
| 3.2 方法 | 第46-50页 |
| 3.2.1 柠檬苦素和诺米林含量分析 | 第46页 |
| 3.2.2 转录组测序及分析 | 第46-49页 |
| 3.2.3 候选基因筛选及验证 | 第49-50页 |
| 3.3 结果 | 第50-64页 |
| 3.3.1 不同基因型柑橘的柠檬苦素和诺米林含量 | 第50-51页 |
| 3.3.2 RNA-seq数据分析及候选基因筛选 | 第51-59页 |
| 3.3.3 qRT-PCR验证候选基因 | 第59-64页 |
| 3.4 讨论 | 第64-66页 |
| 3.4.1 类柠檬苦素合成相关候选基因的鉴定 | 第64-65页 |
| 3.4.2 转运蛋白可能参与诺米林的长距离运输 | 第65-66页 |
| 3.4.3 CiOSC参与类柠檬苦素的生物合成 | 第66页 |
| 3.5 小结 | 第66-68页 |
| 第四章 角鲨烯合成酶基因的克隆和表达分析 | 第68-84页 |
| 4.1 材料 | 第68页 |
| 4.2 方法 | 第68-72页 |
| 4.2.1 总RNA提取及反转录 | 第68页 |
| 4.2.2 角鲨烯合成酶基因全长序列克隆 | 第68-71页 |
| 4.2.3 鲨烯合成酶基因生物信息学分析 | 第71页 |
| 4.2.4 角鲨烯合成酶基因进化树构建 | 第71页 |
| 4.2.5 组织特异性表达分析 | 第71-72页 |
| 4.2.6 非生物胁迫条件下的SQS基因表达分析 | 第72页 |
| 4.3 结果 | 第72-80页 |
| 4.3.1 柑橘中SQS基因的克隆 | 第72页 |
| 4.3.2 角鲨烯合成酶基因生物信息学分析 | 第72-78页 |
| 4.3.3 柑橘CiSQS基因表达分析 | 第78-80页 |
| 4.4 讨论 | 第80-81页 |
| 4.4.1 SQS基因的保守性较高 | 第80-81页 |
| 4.4.2 CiSQS基因的转录水平和诱导表达 | 第81页 |
| 4.5 小结 | 第81-84页 |
| 第五章 转基因验证CiSQS基因对类柠檬苦素生物合成的影响 | 第84-96页 |
| 5.1 材料 | 第84页 |
| 5.2 方法 | 第84-88页 |
| 5.2.1 锦橙实生苗的培养 | 第84页 |
| 5.2.2 目的片段克隆 | 第84-85页 |
| 5.2.3 RNAi表达载体构建 | 第85-86页 |
| 5.2.4 过量表达载体构建 | 第86-87页 |
| 5.2.5 根癌农杆菌介导的柑橘遗传转化 | 第87页 |
| 5.2.6 转基因植株鉴定 | 第87-88页 |
| 5.2.7 转基因植株的柠檬苦素和诺米林含量分析 | 第88页 |
| 5.2.8 转基因植株qRT-PCR分析 | 第88页 |
| 5.3 结果 | 第88-94页 |
| 5.3.1 CiSQS基因的遗传转化 | 第88-92页 |
| 5.3.2 CiSQS转基因锦橙植株的表型鉴定 | 第92-93页 |
| 5.3.3 转基因植株中合成三萜物质的内源基因的表达变化 | 第93-94页 |
| 5.4 讨论 | 第94-95页 |
| 5.4.1 调控CiSQS基因的表达对类柠檬苦素含量的影响 | 第94-95页 |
| 5.4.2 调控CiSQS基因的表达对三萜类生物合成基因表达的影响 | 第95页 |
| 5.5 小结 | 第95-96页 |
| 第六章 柑橘的TRV介导的VIGS的构建及CiOSC基因的功能验证 | 第96-106页 |
| 6.1 材料 | 第96页 |
| 6.2 方法 | 第96-99页 |
| 6.2.1 载体构建 | 第96-98页 |
| 6.2.2 农杆菌浸染 | 第98-99页 |
| 6.2.3 沉默植株的鉴定和基因表达分析 | 第99页 |
| 6.3 结果 | 第99-103页 |
| 6.3.1 柑橘来源的报告基因在本生烟上的沉默效果 | 第99-100页 |
| 6.3.2 构建适合柑橘基因沉默的VIGS技术及其沉默效率 | 第100-101页 |
| 6.3.3 浸染条件的优化 | 第101-102页 |
| 6.3.4 VIGS沉默CiOSC基因 | 第102-103页 |
| 6.4 讨论 | 第103-105页 |
| 6.4.1 VIGS在不同柑橘品种中的沉默效果分析 | 第103-104页 |
| 6.4.2 VIGS用于验证CiOSC对类柠檬苦素生物合成的作用 | 第104-105页 |
| 6.5 小结 | 第105-106页 |
| 第七章 讨论和结论 | 第106-110页 |
| 7.1 讨论 | 第106-108页 |
| 7.2 结论 | 第108页 |
| 7.3 创新点 | 第108页 |
| 7.4 研究展望 | 第108-110页 |
| 参考文献 | 第110-122页 |
| 附录 | 第122-126页 |
| 附录Ⅰ 用于类柠檬苦素含量和基因功能分析的柑橘品种 | 第122-123页 |
| 附录Ⅱ 果实样品中的柠檬苦素和诺米林及标准品的UPLC-MS/MS图谱 | 第123-124页 |
| 附录Ⅲ 用于RNA-seq分析的不同发育时期的东风早柚叶片 | 第124-125页 |
| 附录Ⅳ 用于RNA-seq的qRT-PCR分析的引物 | 第125-126页 |
| 致谢 | 第126-128页 |
| 发表论文及参加课题 | 第128页 |
