| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 主要缩略词 | 第13-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-32页 |
| 1.1 miRNA的发现及产生过程 | 第14-15页 |
| 1.1.1 miRNA的发现 | 第14页 |
| 1.1.2 miRNA的产生过程 | 第14-15页 |
| 1.2 miRNA在调控免疫耐受方面的重要意义 | 第15-22页 |
| 1.2.1 miRNA在免疫系统调控中的方式 | 第16-17页 |
| 1.2.2 miRNA对免疫信号网络的调控作用 | 第17-20页 |
| 1.2.2.1 miRNA的信号控制模式 | 第17-18页 |
| 1.2.2.2 miRNA介导调控的免疫信号网络 | 第18-19页 |
| 1.2.2.3 miRNA控制免疫信号的强度和阈值 | 第19-20页 |
| 1.2.2.4 miRNA对免疫信号在时间和空间上的控制 | 第20页 |
| 1.2.3 miRNA对免疫应答和耐受的调控 | 第20-22页 |
| 1.2.3.1 miRNA对免疫稳态的调控 | 第20-21页 |
| 1.2.3.2 miRNA对免疫应答和耐受性的调控 | 第21页 |
| 1.2.3.3 miRNA对自身免疫的调控 | 第21-22页 |
| 1.3 miRNA参与果蝇免疫应答调控的研究进展 | 第22-29页 |
| 1.3.1 果蝇是一个很好的研究模型 | 第22-25页 |
| 1.3.2 miRNA靶基因的预测 | 第25-27页 |
| 1.3.3 免疫相关的miRNA在昆虫中的研究进展 | 第27-29页 |
| 1.4 本论文的研究目的及意义 | 第29页 |
| 1.5 本论文的创新点 | 第29-31页 |
| 1.6 本论文的技术路线 | 第31-32页 |
| 第2章 感染M.lutes果蝇的small RNA-seq分析 | 第32-44页 |
| 2.1 引言 | 第32页 |
| 2.2 材料、试剂和仪器 | 第32-33页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第32页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第32页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第32-33页 |
| 2.3 实验方法 | 第33-38页 |
| 2.3.1 果蝇培养 | 第33-34页 |
| 2.3.2 果蝇感染实验 | 第34页 |
| 2.3.3 果蝇总RNA提取 | 第34页 |
| 2.3.4 果蝇mRNA实时荧光定量PCR | 第34-36页 |
| 2.3.5 样品的准备和Small RNA-seq | 第36页 |
| 2.3.6 果蝇miRNA实时荧光定量PCR检测 | 第36-38页 |
| 2.4 实验结果 | 第38-43页 |
| 2.4.1 果蝇Toll信号通路基因不同时间点的表达分析 | 第38-39页 |
| 2.4.2 Small RNA-seq的结果分析 | 第39-40页 |
| 2.4.3 差异表达的miRNA分析 | 第40-42页 |
| 2.4.4 Small RNA-seq结果验证 | 第42-43页 |
| 2.5 讨论 | 第43-44页 |
| 第3章 果蝇Toll信号通路相关miRNA的筛选与鉴定 | 第44-57页 |
| 3.1 引言 | 第44-45页 |
| 3.2 材料、试剂和仪器 | 第45-46页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第45页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第45页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第45-46页 |
| 3.3 实验方法 | 第46-51页 |
| 3.3.1 果蝇培养 | 第46页 |
| 3.3.2 果蝇Gal80~(ts)-tub-Gal4系统的构建 | 第46-47页 |
| 3.3.3 果蝇总RNA提取 | 第47-48页 |
| 3.3.4 果蝇mRNA实时荧光定量PCR | 第48-49页 |
| 3.3.5 果蝇miRNA实时荧光定量PCR检测 | 第49-51页 |
| 3.4 实验结果 | 第51-55页 |
| 3.4.1 Gal80~(ts)-tub-Gal4系统的工作原理 | 第51-52页 |
| 3.4.2 果蝇Toll信号通路相关miRNA的筛选结果 | 第52-53页 |
| 3.4.3 miR-958和miR-310家族分子在果蝇刺激后不同时间点的表达情况 | 第53-54页 |
| 3.4.4 Drosomycin-GFP系统证明miR-958和miR-310家族具有负调控作用 | 第54-55页 |
| 3.5 讨论 | 第55-57页 |
| 第4章 miR-958和miR-310家族分子靶基因的预测 | 第57-62页 |
| 4.1 引言 | 第57页 |
| 4.2 材料和方法 | 第57-58页 |
| 4.2.1 数据收集 | 第57页 |
| 4.2.2 靶基因预测软件 | 第57-58页 |
| 4.2.3 Draw Venn Diagram和Cytoscape软件分析 | 第58页 |
| 4.3 实验结果 | 第58-61页 |
| 4.3.1 Toll信号通路相关的miR-958靶基因预测结果 | 第58-59页 |
| 4.3.2 Toll信号通路相关的miR-310家族靶基因预测结果 | 第59-61页 |
| 4.4 讨论 | 第61-62页 |
| 第5章 miR-958和miR-310家族分子靶基因的体外验证 | 第62-71页 |
| 5.1 引言 | 第62页 |
| 5.2 材料、试剂和仪器 | 第62-63页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第62-63页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第63页 |
| 5.2.3 实验仪器 | 第63页 |
| 5.3 实验方法 | 第63-66页 |
| 5.3.1 果蝇S2细胞的培养 | 第63-64页 |
| 5.3.2 质粒构建 | 第64页 |
| 5.3.3 定点突变质粒的构建 | 第64页 |
| 5.3.4 果蝇S2细胞的转染 | 第64-65页 |
| 5.3.5 Dual-Glo luciferase reporter检测 | 第65-66页 |
| 5.4 实验结果 | 第66-70页 |
| 5.4.1 双荧光素酶报告系统检测原理 | 第66-67页 |
| 5.4.2 miR-958和miR-310家族的靶位点信息 | 第67-68页 |
| 5.4.3 双荧光素酶报告检测结果 | 第68-70页 |
| 5.5 讨论 | 第70-71页 |
| 第6章 miR-958和miR-310家族分子靶基因的体内验证 | 第71-80页 |
| 6.1 引言 | 第71页 |
| 6.2 材料、试剂和仪器 | 第71-72页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第71页 |
| 6.2.2 实验试剂 | 第71-72页 |
| 6.2.3 实验仪器 | 第72页 |
| 6.3 实验方法 | 第72-76页 |
| 6.3.1 果蝇总RNA提取 | 第72-73页 |
| 6.3.2 果蝇mRNA实时荧光定量PCR | 第73-74页 |
| 6.3.3 果蝇总蛋白的提取 | 第74-75页 |
| 6.3.4 Western Blotting | 第75-76页 |
| 6.4 实验结果 | 第76-79页 |
| 6.4.1 miR-310家族靶基因体内检测结果 | 第76-77页 |
| 6.4.2 miR-958靶基因体内检测结果 | 第77-79页 |
| 6.5 讨论 | 第79-80页 |
| 第7章 结论 | 第80-82页 |
| 附录 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-95页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
