| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-13页 |
| 1.1 酵母表达系统简介 | 第7-8页 |
| 1.1.1 酵母表达系统的发展 | 第7页 |
| 1.1.2 毕赤酵母表达系统的优势及应用 | 第7-8页 |
| 1.1.3 Paox1的调控特点 | 第8页 |
| 1.2 甘油转运体研究现状 | 第8-9页 |
| 1.3 碳源阻遏简要 | 第9-10页 |
| 1.4 毕赤酵母表达系统在工业发酵的现状和特点 | 第10-11页 |
| 1.5 论文的立题依据 | 第11-12页 |
| 1.6 论文的研究内容 | 第12-13页 |
| 第二章 材料与方法 | 第13-27页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第13-16页 |
| 2.1.1 菌株质粒 | 第13页 |
| 2.1.2 工具酶和分子量标准 | 第13页 |
| 2.1.3 主要试剂、耗材及试剂盒 | 第13-14页 |
| 2.1.4 主要仪器及配件 | 第14页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第14-15页 |
| 2.1.6 主要培养基 | 第15-16页 |
| 2.2 试验方法 | 第16-27页 |
| 2.2.1 pPICZB-EGFP表达载体的构建 | 第16-18页 |
| 2.2.2 AOX1启动子表达绿色荧光蛋白EGFP菌株的构建 | 第18-20页 |
| 2.2.3 突变菌株 ΔGT1和野生型X-33 不同碳源下AOX1酶活的测定 | 第20页 |
| 2.2.4 不同碳源下 ΔGT1-EGFP和X-EGFP荧光强度的测定 | 第20页 |
| 2.2.5 DOE实验设计 | 第20-22页 |
| 2.2.6 HSA蛋白的重组表达验证模型的可靠性 | 第22-23页 |
| 2.2.7 ΔGT1HSA和X-33HSA优化条件后的分泌发酵表达 | 第23页 |
| 2.2.8 GT2基因的鉴定 | 第23-25页 |
| 2.2.9 ΔGT2-EGFP表型特征鉴定 | 第25-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-47页 |
| 3.1 ΔGT1-EGFP和X-EGFP重组菌株的构建 | 第27-29页 |
| 3.1.1 pPICZB-EGFP载体鉴定 | 第27页 |
| 3.1.2 EGFP等拷贝数的鉴定 | 第27-29页 |
| 3.1.3 小结 | 第29页 |
| 3.2 DOE实验优化结果 | 第29-37页 |
| 3.2.1 ΔGT1和X-33 中AOX1酶活性检测 | 第29-30页 |
| 3.2.2 ΔGT1-EGFP和X-EGFP单位荧光强度测定 | 第30-34页 |
| 3.2.3 实验设计及结果 | 第34-36页 |
| 3.2.4 小结 | 第36-37页 |
| 3.3 HSA分泌蛋白模型的验证 | 第37-40页 |
| 3.3.1 ΔGT1HSA和X-33HSA菌株的鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3.2 HSA基因等拷贝数的筛选 | 第38页 |
| 3.3.3 HSA蛋白胶分析、Western blot检测 | 第38-39页 |
| 3.3.4 小结 | 第39-40页 |
| 3.4 ΔGT2-EGFP敲除菌株的鉴定 | 第40-41页 |
| 3.4.1 GT2基因的敲除 | 第40-41页 |
| 3.4.2 小结 | 第41页 |
| 3.5 GT2基因功能的鉴定 | 第41-47页 |
| 3.5.1 ΔGT2-EGFP在不同碳源下生长情况 | 第41-43页 |
| 3.5.2 ΔGT2-EGFP在不同碳源下AOX1酶活 | 第43-44页 |
| 3.5.3 荧光显微镜鉴定EGFP | 第44页 |
| 3.5.4 ΔGT2-EGFP在不同碳源下单位荧光强度 | 第44-45页 |
| 3.5.5 发酵上清甘油含量的检测 | 第45-46页 |
| 3.5.6 小结 | 第46-47页 |
| 主要结论与展望 | 第47-49页 |
| 主要结论 | 第47-48页 |
| 展望 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54页 |
