| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| 1.1 C-C的合成 | 第7页 |
| 1.2 醛缩酶的催化机理及类型 | 第7-10页 |
| 1.2.1 醛缩酶的催化机理 | 第7-8页 |
| 1.2.2 醛缩酶的类型 | 第8-10页 |
| 1.3 海栖热袍菌简介 | 第10页 |
| 1.4 Nus融合标签介绍 | 第10-11页 |
| 1.5 甘油激酶简介 | 第11页 |
| 1.6 稀有糖 | 第11-13页 |
| 1.6.1 稀有糖及其应用 | 第11-12页 |
| 1.6.2 稀有糖的合成途径 | 第12-13页 |
| 1.7 本论文的研究意义和主要研究内容 | 第13-15页 |
| 1.7.1 本论文的研究意义 | 第13-14页 |
| 1.7.2 本论文的主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-19页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 酶、试剂及耗材 | 第15-16页 |
| 2.1.3 培养基及其他溶液的配制 | 第16-18页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-28页 |
| 2.2.1 大肠杆菌高效感受态的制取 | 第19页 |
| 2.2.2 大肠杆菌质粒转化 | 第19页 |
| 2.2.3 重组载体的构建 | 第19-21页 |
| 2.2.4 粗提质粒方法 | 第21页 |
| 2.2.5 质粒的构建 | 第21-22页 |
| 2.2.6 RhaD_(T.mari)蛋白的氨基酸序列同源性比对 | 第22页 |
| 2.2.7 Nus-RhaD_(T.mari)醛缩酶的表达和纯化 | 第22-23页 |
| 2.2.8 Nus标签的切除及目的蛋白的纯化 | 第23页 |
| 2.2.9 RhaD_(T.mari)和Nus-RhaD_(T.mari)醛缩酶的立体选择性分析 | 第23-24页 |
| 2.2.10 温度对RhaD_(T.mari)醛缩酶的影响 | 第24页 |
| 2.2.11 Nus-RhaD_(T.mari)以DL3磷酸甘油为起始底物“一釜四酶法”合成稀有糖 | 第24-25页 |
| 2.2.12 稀有糖的分离纯化 | 第25-27页 |
| 2.2.13 GK酶的表达与纯化 | 第27页 |
| 2.2.14 其他醛缩酶及甘油磷酸氧化酶的表达和纯化 | 第27页 |
| 2.2.15 以甘油或二羟基丙酮为起始底物“一釜多酶法”合成酮糖 | 第27-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-44页 |
| 3.1 RhaD_(T.mari)醛缩酶的克隆及在合成稀有糖的应用 | 第28-38页 |
| 3.1.1 重组质粒pET43a-rhaD_(T.mari)的构建 | 第28-29页 |
| 3.1.2 RhaD_(T.mari)蛋白的氨基酸序列同源性比对 | 第29页 |
| 3.1.3 Nus-RhaD_(T.mari)醛缩酶的表达与纯化 | 第29-30页 |
| 3.1.4 Nus-RhaD_(T.mari)融合蛋白Nus标签的去除 | 第30-31页 |
| 3.1.5 RhaD_(T.mari)和Nus-RhaD_(T.mari)醛缩酶的立体选择性分析 | 第31-33页 |
| 3.1.6 温度对RhaD_(T.mari)酶活的影响 | 第33页 |
| 3.1.7 Nus-RhaD_(T.mari)以DL-GP为起始底物“一釜四酶法”合成稀有糖 | 第33页 |
| 3.1.8 大量反应后生成产物的 1H NMR鉴定 | 第33-38页 |
| 3.2 甘油激酶的克隆及在合成酮糖中的应用 | 第38-44页 |
| 3.2.1 重组质粒pET28a-glpK的构建 | 第38页 |
| 3.2.2 甘油激酶的表达和纯化 | 第38-39页 |
| 3.2.3 甘油磷酸氧化酶和多个醛缩酶的表达纯化 | 第39-40页 |
| 3.2.4 TLC检测以甘油为起始底物“一釜多酶法”合成酮糖 | 第40页 |
| 3.2.5 HPLC检测以甘油为起始底物的“一釜多酶法”合成酮糖 | 第40-42页 |
| 3.2.6 TLC检测以二羟基丙酮为起始底物“一釜多酶法”合成酮糖 | 第42页 |
| 3.2.7 HPLC检测以二羟基丙酮为起始底物“一釜多酶法”合成酮糖 | 第42-44页 |
| 主要结论与展望 | 第44-46页 |
| 主要结论 | 第44-45页 |
| 展望 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第51页 |
