| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 中英文缩略词表 | 第9-14页 |
| 1 综述 | 第14-26页 |
| 1.1 中药的发展 | 第14-17页 |
| 1.1.1 中药的发展历程 | 第14-15页 |
| 1.1.2 中药与其他学科的合作 | 第15-16页 |
| 1.1.3 热门研究的中药 | 第16-17页 |
| 1.2 苦瓜的研究 | 第17-21页 |
| 1.2.1 苦瓜背景 | 第17-18页 |
| 1.2.2 苦瓜核糖体失活蛋白 | 第18-19页 |
| 1.2.3 苦瓜蛋白MAP30的研究优势 | 第19-21页 |
| 1.3 MAP30的研究 | 第21-23页 |
| 1.3.1 MAP30的传统分离 | 第21页 |
| 1.3.2 MAP30转基因植物 | 第21页 |
| 1.3.3 MAP30相关剂型研究 | 第21-22页 |
| 1.3.4 MAP30的异源表达 | 第22页 |
| 1.3.5 MAP30的改造 | 第22-23页 |
| 1.4 本课题的研究内容、目的意义及技术路线 | 第23-26页 |
| 1.4.1 本课题研究目的意义 | 第23-24页 |
| 1.4.2 本课题研究内容 | 第24-25页 |
| 1.4.3 本课题的技术路线 | 第25-26页 |
| 2 苦瓜蛋白MAP30的生物信息学分析 | 第26-38页 |
| 2.1 生物信息学分析类型及方法 | 第26-28页 |
| 2.1.1 苦瓜蛋白MAP30序列分析及系统进化树的构建 | 第26页 |
| 2.1.2 苦瓜蛋白MAP30基本理化性质预测 | 第26-27页 |
| 2.1.3 苦瓜蛋白MAP30二级结构预测 | 第27-28页 |
| 2.1.4 苦瓜蛋白MAP30三维结构预测 | 第28页 |
| 2.2 结果与分析 | 第28-36页 |
| 2.2.1 苦瓜蛋白MAP30序列分析结果 | 第28-29页 |
| 2.2.2 苦瓜蛋白MAP30理化性质预测结果 | 第29-34页 |
| 2.2.3 苦瓜蛋白MAP30二级结构预测结果 | 第34页 |
| 2.2.4 苦瓜蛋白MAP30三维结构预测结果 | 第34-36页 |
| 2.3 讨论 | 第36页 |
| 2.4 小结 | 第36-38页 |
| 3 MAP30基因的克隆 | 第38-55页 |
| 3.1 实验材料和仪器 | 第38-41页 |
| 3.1.1 药品试剂 | 第38-39页 |
| 3.1.2 基因工程原料 | 第39页 |
| 3.1.3 溶液及培养基的配制 | 第39-41页 |
| 3.1.4 主要仪器与设备 | 第41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-50页 |
| 3.2.1 CTAB法提取苦瓜全基因组 | 第41-43页 |
| 3.2.2 苦瓜全基因组含量及纯度的测定 | 第43-44页 |
| 3.2.3 引物设计 | 第44页 |
| 3.2.4 PCR法扩增苦瓜蛋白MAP30基因 | 第44-45页 |
| 3.2.5 琼脂糖凝胶电泳验证及基因片段的回收 | 第45-46页 |
| 3.2.6 pMD18-T载体与MAP30基因片段的连接 | 第46-47页 |
| 3.2.7 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第47-48页 |
| 3.2.8 重组质粒pMD18-T-MAP30的转化导入 | 第48页 |
| 3.2.9 重组质粒pMD18-T-MAP30的鉴定 | 第48-50页 |
| 3.3 结果与分析 | 第50-53页 |
| 3.3.1 苦瓜全基因组的提取 | 第50页 |
| 3.3.2 苦瓜蛋白MAP30基因的扩增 | 第50页 |
| 3.3.3 重组质粒pMD18-T-MAP30的鉴定结果 | 第50-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-54页 |
| 3.5 小结 | 第54-55页 |
| 4 苦瓜蛋白MAP30的表达 | 第55-79页 |
| 4.1 实验材料与仪器 | 第55-58页 |
| 4.1.1 药品试剂 | 第55-56页 |
| 4.1.2 基因工程原料 | 第56页 |
| 4.1.3 溶液及培养基的配制 | 第56-58页 |
| 4.1.4 主要仪器与设备 | 第58页 |
| 4.2 实验方法 | 第58-68页 |
| 4.2.1 表达质粒与pMD18-T-MAP30质粒的双酶切 | 第58-59页 |
| 4.2.2 表达载体与目的MAP30基因的连接反应 | 第59-60页 |
| 4.2.3 连接产物转入感受态细胞中 | 第60-61页 |
| 4.2.4 重组质粒pET28a-MAP30及pET32a-MAP30的鉴定 | 第61-62页 |
| 4.2.5 生长曲线的测定 | 第62页 |
| 4.2.6 苦瓜融合表达蛋白MAP30的表达的初步分析 | 第62-63页 |
| 4.2.7 苦瓜融合表达蛋白MAP30的可溶性分析 | 第63-64页 |
| 4.2.8 SDS-PAGE电泳操作 | 第64-65页 |
| 4.2.9 Western blot鉴定 | 第65-68页 |
| 4.3 结果与分析 | 第68-76页 |
| 4.3.1 表达质粒与pMD18-T-MAP30质粒双酶切结果 | 第68-69页 |
| 4.3.2 表达质粒pET-28a-MAP30及pET-32a-MAP30的鉴定结果 | 第69-71页 |
| 4.3.3 生长曲线趋势图 | 第71-72页 |
| 4.3.4 苦瓜融合蛋白MAP30初步诱导表达结果 | 第72-74页 |
| 4.3.5 苦瓜融合蛋白MAP30的可溶性分析 | 第74-75页 |
| 4.3.6 融合蛋白MAP30的免疫印迹分析 | 第75-76页 |
| 4.4 讨论 | 第76-78页 |
| 4.5 小结 | 第78-79页 |
| 5 苦瓜融合蛋白MAP30抑菌活性实验的研究 | 第79-91页 |
| 5.1 实验材料与仪器 | 第79-80页 |
| 5.1.1 药品试剂 | 第79页 |
| 5.1.2 溶液及培养基的配制 | 第79-80页 |
| 5.1.3 菌株原料 | 第80页 |
| 5.2 实验方法 | 第80-83页 |
| 5.2.1 融合蛋白MAP30的纯化 | 第80-82页 |
| 5.2.2 BCA蛋白定量法测定蛋白含量 | 第82页 |
| 5.2.3 牛津杯法测定MAP30融合蛋白的抑菌谱 | 第82-83页 |
| 5.2.4 最低抑菌浓度的测定 | 第83页 |
| 5.2.5 生长抑制试验 | 第83页 |
| 5.3 结果与分析 | 第83-89页 |
| 5.3.1 蛋白含量的测定 | 第83-84页 |
| 5.3.2 牛津杯法确定苦瓜融合蛋白MAP30的抑菌谱 | 第84-86页 |
| 5.3.3 最低抑菌浓度的测定结果 | 第86页 |
| 5.3.4 生长抑制试验结果 | 第86-89页 |
| 5.4 讨论 | 第89-90页 |
| 5.5 小结 | 第90-91页 |
| 6 结论与展望 | 第91-93页 |
| 6.1 结论 | 第91-92页 |
| 6.2 展望 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-105页 |
| 附录A GeneBank中MAP30的基因序列信息 | 第105-106页 |
| 附录B 克隆重组子MAP30基因序列 | 第106-108页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第108-110页 |
