| 中文摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 1 前言 | 第10-17页 |
| 1.1 原虫Trx的结构 | 第10-11页 |
| 1.2 Trx的生物学活性 | 第11-14页 |
| 1.2.1 抗氧化作用 | 第11-12页 |
| 1.2.2 抑制凋亡的作用 | 第12页 |
| 1.2.3 蛋白结合作用 | 第12-13页 |
| 1.2.4 还原并修复蛋白损伤 | 第13页 |
| 1.2.5 生长调节作用 | 第13-14页 |
| 1.3 Trx与癌症 | 第14-15页 |
| 1.4 小结 | 第15-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第17页 |
| 2.2 主要仪器 | 第17-18页 |
| 2.3 实验试剂 | 第18-24页 |
| 2.3.1 主要试剂 | 第18页 |
| 2.3.2 试剂配方 | 第18-24页 |
| 2.4 B.mTrx5 和Trx6的基因克隆 | 第24-28页 |
| 2.4.1 收集田鼠巴贝斯虫虫体 | 第24-25页 |
| 2.4.2 田鼠巴贝斯虫总RNA的提取 | 第25页 |
| 2.4.3 田鼠巴贝斯虫cDNA的合成 | 第25-26页 |
| 2.4.4 田鼠巴贝斯虫Trx5和Trx6保守片段的扩增 | 第26-28页 |
| 2.5 表达质粒的构建 | 第28-31页 |
| 2.5.1 pET-30a空质粒的提取 | 第28-29页 |
| 2.5.2 pET-30a空质粒的双酶切 | 第29页 |
| 2.5.3 连接及转化 | 第29-30页 |
| 2.5.4 连接产物的转化 | 第30页 |
| 2.5.5 阳性菌株鉴定及测序 | 第30-31页 |
| 2.6 巴贝斯虫Trx5和Trx6的 3’端快速扩增 | 第31-34页 |
| 2.6.1 引物设计 | 第31页 |
| 2.6.2 cDNA第一条链的合成 | 第31-32页 |
| 2.6.3 3’端的快速扩增 | 第32-33页 |
| 2.6.4 PCR扩增产物的链接与转化 | 第33页 |
| 2.6.5 3’端快速扩增片段的克隆测序 | 第33-34页 |
| 2.7 巴贝斯虫Trx5和Trx65’端快速扩增 | 第34-37页 |
| 2.7.1 引物设计 | 第34页 |
| 2.7.2 cDNA第一条链的合成 | 第34-35页 |
| 2.7.3 cDNA第一链的纯化 | 第35页 |
| 2.7.4 cDNA末端加尾 | 第35-36页 |
| 2.7.5 目的基因 5’端的快速扩增 | 第36-37页 |
| 2.7.6 5’端扩增片段的克隆测序 | 第37页 |
| 2.8 全长基因的序列分析 | 第37页 |
| 2.9 重组蛋白的表达 | 第37-39页 |
| 2.9.1 IPTG诱导蛋白表达 | 第37-38页 |
| 2.9.2 SDS-PAGE鉴定重组蛋白 | 第38-39页 |
| 2.10 蛋白纯化及定量 | 第39-40页 |
| 2.10.1 蛋白纯化 | 第39-40页 |
| 2.10.2 蛋白定量 | 第40页 |
| 2.11 重组蛋白Trx5和Trx6的活性分析 | 第40-41页 |
| 2.12 多克隆抗体的制备 | 第41页 |
| 2.13 重组蛋白Trx5和Trx6多克隆抗体的Western blot鉴定 | 第41-42页 |
| 2.14 间接免疫荧光实验（IFAT） | 第42-43页 |
| 3 实验结果及分析 | 第43-59页 |
| 3.1 总RNA的提取 | 第43页 |
| 3.2 保守片段的扩增 | 第43-45页 |
| 3.2.1 Trx5的保守片段的扩增 | 第43-44页 |
| 3.2.2 Trx6的保守片段的扩增 | 第44-45页 |
| 3.3 3’race扩增结果 | 第45-47页 |
| 3.3.1 Trx5的 3’端快速扩增 | 第45-46页 |
| 3.3.2 Trx6的 3’端快速扩增 | 第46-47页 |
| 3.4 5’race扩增结果 | 第47-49页 |
| 3.4.1 Trx5的 5’端快速扩增 | 第47-48页 |
| 3.4.2 Trx6的 5’端快速扩增 | 第48-49页 |
| 3.5 基因的全长及序列分析 | 第49-53页 |
| 3.5.1 Trx5基因的全长序列及预测的氨基酸序列 | 第49-51页 |
| 3.5.2 Trx6基因的全长序列及预测的氨基酸序列 | 第51-53页 |
| 3.6 表达质粒的构建 | 第53页 |
| 3.6.1 载体p ET-30a的双酶切 | 第53页 |
| 3.6.2 重组质粒的PCR鉴定 | 第53页 |
| 3.7 重组蛋白的表达 | 第53-54页 |
| 3.8 蛋白纯化与定量 | 第54-55页 |
| 3.8.1 蛋白纯化 | 第54-55页 |
| 3.8.2 蛋白定量 | 第55页 |
| 3.9 重组蛋白的活性分析 | 第55-56页 |
| 3.10 重组蛋白Trx5和Trx6的多克隆血清的Western blot鉴定 | 第56-57页 |
| 3.11 间接免疫荧光实验（IFAT）检测 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
