| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-26页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征的概述 | 第13-14页 |
| 1.2 PRRS流行病学 | 第14页 |
| 1.3 PRRSV的分类地位及生物学特性 | 第14-16页 |
| 1.3.1 分类地位及形态特征 | 第14-15页 |
| 1.3.2 生物学特性 | 第15-16页 |
| 1.4 分子生物学特点 | 第16-21页 |
| 1.4.1 PRRSV的基因组结构 | 第16-17页 |
| 1.4.2 非结构蛋白 | 第17-18页 |
| 1.4.3 PRRSV结构蛋白 | 第18-20页 |
| 1.4.4 PRRSV的遗传变异 | 第20-21页 |
| 1.5 PRRSV免疫反应 | 第21-23页 |
| 1.5.1 PRRSV体液免疫 | 第21-22页 |
| 1.5.2 PRRSV细胞免疫 | 第22-23页 |
| 1.6 PRRSV致病机制 | 第23页 |
| 1.7 症状 | 第23-25页 |
| 1.7.1 临床症状 | 第23-24页 |
| 1.7.2 剖检病变 | 第24页 |
| 1.7.3 显微病变 | 第24-25页 |
| 1.8 本研究的目的及意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-45页 |
| 2.1 材料 | 第26-29页 |
| 2.1.1 病毒毒株及血清 | 第26页 |
| 2.1.2 病毒质粒 | 第26-27页 |
| 2.1.3 工程菌 | 第27页 |
| 2.1.4 细胞器 | 第27页 |
| 2.1.5 蛋白试剂及工具酶 | 第27页 |
| 2.1.6 试验所用溶液及其配制 | 第27-29页 |
| 2.2 方法 | 第29-45页 |
| 2.2.1 pVAX1-N30A引物设计与PCR扩增 | 第29页 |
| 2.2.2 RT-PCR扩增ORF5基因 | 第29-30页 |
| 2.2.3 获得编码PRRSV GP5表位A突变的基因片段 | 第30-31页 |
| 2.2.4 纯化回收PCR产物 | 第31-32页 |
| 2.2.5 制备DH5α 感受态细胞 | 第32-33页 |
| 2.2.6 ORF5基因的TA克隆与转化 | 第33-34页 |
| 2.2.7 提取重组质粒 | 第34页 |
| 2.2.8 重组质粒鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.9 定点突变原理 | 第35页 |
| 2.2.10 pVAX1-N34A引物序列 | 第35-36页 |
| 2.2.11 pVAX1-N35A引物序列 | 第36页 |
| 2.2.12 pVAX1-N44A引物序列 | 第36页 |
| 2.2.13 pVAX1-N51A引物序列 | 第36页 |
| 2.2.14 定点突变方法 | 第36-37页 |
| 2.2.15 293T细胞培养 | 第37-38页 |
| 2.2.16 转染细胞 | 第38页 |
| 2.2.17 PRRSV RNA提取 | 第38-39页 |
| 2.2.18 反转录 | 第39-40页 |
| 2.2.19 荧光定量PCR检测 | 第40-44页 |
| 2.2.20 细胞流式技术 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-55页 |
| 3.1 基因克隆鉴定与分析 | 第45-46页 |
| 3.1.1 RT-PCR扩增ORF5基因 | 第45-46页 |
| 3.1.2 重组质粒p MD18-T-ORF5的鉴定与分析 | 第46页 |
| 3.2 糖基化位点突变的鉴定 | 第46-49页 |
| 3.2.1 Over-lap PCR | 第46-48页 |
| 3.2.2 突变体重组质粒鉴定 | 第48页 |
| 3.2.3 标准品质粒电泳图 | 第48-49页 |
| 3.3 ORF5转录后m RNA动态变化 | 第49-50页 |
| 3.3.1 实时定量PCR熔解曲线 | 第49页 |
| 3.3.2 实时定量PCR标准曲线 | 第49-50页 |
| 3.4 转染PRRSV ORF5突变体细胞凋亡状况 | 第50-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 研究生期间发表论文 | 第68页 |
