| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-17页 |
| 1.1 研究背景 | 第9-10页 |
| 1.1.1 环境和能源问题 | 第9页 |
| 1.1.2 异丁醇的优点及生产方式 | 第9页 |
| 1.1.3 异丁醇代谢途径分析 | 第9-10页 |
| 1.2 国内外研究进展 | 第10-14页 |
| 1.2.1 调控转氢酶和NAD激酶解决还原力的问题 | 第11-12页 |
| 1.2.2 联产异丁醇和乙醇解决还原力问题 | 第12-13页 |
| 1.2.3 改造乙酰羟基酸还原异构酶 | 第13-14页 |
| 1.3 研究目的及意义,研究内容 | 第14-17页 |
| 1.3.1 研究目的及意义 | 第14页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第14-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-37页 |
| 2.1 材料 | 第17-27页 |
| 2.1.1 试剂和试剂盒 | 第17-18页 |
| 2.1.2 仪器和设备 | 第18页 |
| 2.1.3 菌株和质粒 | 第18-21页 |
| 2.1.4 引物 | 第21-26页 |
| 2.1.5 培养基 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-37页 |
| 2.2.1 厌氧发酵生产异丁醇 | 第27页 |
| 2.2.2 酶活测定 | 第27-29页 |
| 2.2.3 大肠杆菌的遗传改造方法 | 第29-37页 |
| 3 结果与讨论 | 第37-58页 |
| 3.1 改造大肠杆菌联产异丁醇和乙醇 | 第37-44页 |
| 3.1.1 构建联产菌株 | 第37-39页 |
| 3.1.2 激活磷酸戊糖途径 | 第39-41页 |
| 3.1.3 弱化乙醇合成途径改善异丁醇生产 | 第41-43页 |
| 3.1.4 组合调控adhE和zwf | 第43-44页 |
| 3.2 使用NADH型KARI酶构建并优化异丁醇生产菌株 | 第44-58页 |
| 3.2.1 构建异丁醇生产菌株 | 第44-47页 |
| 3.2.2 KARI_Tp RBSL菌株的构建 | 第47-49页 |
| 3.2.3 AlsS RBSL菌株的构建 | 第49-51页 |
| 3.2.4 KivD-IlvD RBSL菌株的构建 | 第51-52页 |
| 3.2.5 KARI_Tp RBSL菌株的构建 | 第52-54页 |
| 3.2.6 敲除醇脱氢酶基因 | 第54-56页 |
| 3.2.7 PntAB RBSL菌株的构建 | 第56-58页 |
| 4 结论 | 第58-59页 |
| 5 展望 | 第59-60页 |
| 6 参考文献 | 第60-67页 |
| 7 论文发表情况 | 第67-68页 |
| 8 致谢 | 第68页 |
