| 中文摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-17页 |
| 第一章 前言 | 第17-27页 |
| ·重金属概述 | 第17-19页 |
| ·镉 | 第18页 |
| ·铜 | 第18-19页 |
| ·锌 | 第19页 |
| ·金属硫蛋白基因概述 | 第19-22页 |
| ·金属硫蛋白的特点 | 第20-21页 |
| ·金属硫蛋白的生理功能 | 第21-22页 |
| ·金属硫蛋白在昆虫中的研究现状 | 第22页 |
| ·中华稻蝗 | 第22-23页 |
| ·中华稻蝗的生活习性 | 第22-23页 |
| ·中华稻蝗的生活史 | 第23页 |
| ·镉染毒对中华稻蝗的影响及数字基因表达谱(DGE)分析 | 第23-24页 |
| ·RNA干扰应用 | 第24页 |
| ·研究内容及意义 | 第24-25页 |
| ·研究内容 | 第24-25页 |
| ·研究意义 | 第25页 |
| ·本文创新之处及与所发表论文的相关性 | 第25-27页 |
| 第二章 中华稻蝗金属硫蛋白基因的分子特性 | 第27-40页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·供试昆虫 | 第27页 |
| ·相关试剂和仪器 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-31页 |
| ·转录组测序的样品制备 | 第28页 |
| ·中华稻蝗总RNA提取和反转录 | 第28页 |
| ·中华稻蝗金属硫蛋白基因的验证 | 第28页 |
| ·引物设计和基因扩增 | 第28-29页 |
| ·转化 | 第29-30页 |
| ·中华稻蝗金属硫蛋白基因的表达 | 第30-31页 |
| ·统计学分析 | 第31页 |
| ·实验结果 | 第31-36页 |
| ·中华稻蝗金属硫蛋白基因的验证 | 第31-33页 |
| ·中华稻蝗金属硫蛋白基因序列的分析 | 第33-34页 |
| ·采用RT-qPCR引物及其扩增效率检测 | 第34-35页 |
| ·MT基因在中华稻蝗不同发育阶段的表达模式 | 第35页 |
| ·MT基因在中华稻蝗不同组织部位的表达模式 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-40页 |
| 第三章 中华稻蝗金属硫蛋白基因功能研究 | 第40-52页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第40-41页 |
| ·试验方法 | 第41-46页 |
| ·引物的设计 | 第41-42页 |
| ·体外合成dsRNA | 第42-43页 |
| ·中华稻蝗MT基因沉默效率的检测 | 第43页 |
| ·采用RNAi技术验证金属硫蛋白基因在中华稻蝗体内的解毒能力 | 第43页 |
| ·制备CaCl_2感受态细胞 | 第43-44页 |
| ·构建重组质粒进行OcMT异源表达 | 第44-45页 |
| ·表达OcMT融合蛋白的大肠杆菌对金属的耐受能力 | 第45-46页 |
| ·实验结果 | 第46-49页 |
| ·中华稻蝗MT基因沉默效率 | 第46-47页 |
| ·中华稻蝗MT基因沉默效率后不同浓度重金属的耐受能力 | 第47页 |
| ·中华稻蝗MT基因的异源表达 | 第47-49页 |
| ·OcMT融合蛋白对重金属镉的耐受性 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-52页 |
| 第四章 金属急性染毒对中华稻蝗MT基因及解毒酶的影响 | 第52-67页 |
| ·实验材料 | 第52-53页 |
| ·供试昆虫 | 第52页 |
| ·主要药品和仪器 | 第52-53页 |
| ·实验方法 | 第53-55页 |
| ·三种金属对中华稻蝗半致死浓度测定 | 第53页 |
| ·中华稻蝗急性金属处理 | 第53页 |
| ·中华稻蝗不同组织的收集 | 第53-54页 |
| ·中华稻蝗体内不同解毒酶酶活测定 | 第54页 |
| ·三种金属急性处理后中华稻蝗脂肪体和马氏管的观察 | 第54-55页 |
| ·实验结果 | 第55-63页 |
| ·三种金属对中华稻蝗的半致死浓度 | 第55-56页 |
| ·镉对中华稻蝗解毒酶活性的影响 | 第56页 |
| ·镉对中华稻蝗金属硫蛋白的诱导表达 | 第56-58页 |
| ·铜对中华稻蝗金属硫蛋白的诱导表达 | 第58-60页 |
| ·锌对中华稻蝗金属硫蛋白的诱导表达 | 第60-61页 |
| ·三种金属对中华稻蝗脂肪体形态的影响 | 第61-62页 |
| ·三种金属对中华稻蝗马氏管的影响 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-67页 |
| 第五章 镉染毒对中华稻蝗组织形态的影响 | 第67-82页 |
| ·实验材料 | 第67-68页 |
| ·小麦染毒 | 第67页 |
| ·实验昆虫 | 第67-68页 |
| ·试剂和仪器 | 第68页 |
| ·实验方法 | 第68-72页 |
| ·光镜观察中华稻蝗血细胞 | 第68-69页 |
| ·中华稻蝗不同组织的收集 | 第69页 |
| ·石蜡切片的制备和光镜观察 | 第69-71页 |
| ·半薄切片的制备和电镜观察 | 第71-72页 |
| ·实验结果 | 第72-79页 |
| ·染毒期间试虫行为观察 | 第72-73页 |
| ·镉慢性染毒后中华稻蝗血细胞分析 | 第73-75页 |
| ·中华稻蝗消化道的总体特征 | 第75-76页 |
| ·镉慢性染毒对中华稻蝗胃盲囊和中肠微绒毛的影响 | 第76-77页 |
| ·镉慢性染毒对中华稻蝗马氏管的影响 | 第77-78页 |
| ·镉慢性染毒对中华稻蝗中肠和围食膜的影响 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-82页 |
| 第六章 中华稻蝗金属硫蛋白原核表达及功能分析 | 第82-95页 |
| ·实验材料 | 第82页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第82页 |
| ·实验方法 | 第82-89页 |
| ·中华稻蝗金属硫蛋白基因原核表达引物的设计 | 第82-83页 |
| ·构建重组质粒 | 第83-85页 |
| ·重组质粒通过感受态转化及验证(鉴定) | 第85-86页 |
| ·OcMT基因的原核表达 | 第86-87页 |
| ·重组OcMT蛋白(融合蛋白)对铜的耐受性 | 第87页 |
| ·重组OcMT蛋白(融合蛋白)的分离纯化 | 第87-88页 |
| ·酶切融合蛋白的6-His标签 | 第88页 |
| ·测定融合蛋白的浓度和含量 | 第88-89页 |
| ·OcMT蛋白对不同金属的结合能力 | 第89页 |
| ·实验结果 | 第89-92页 |
| ·酶切验证重组质粒中含有OcMT基因 | 第89页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测融合蛋白的表达 | 第89-90页 |
| ·重组OcMT蛋白(融合蛋白)的功能验证 | 第90-91页 |
| ·OcMT蛋白对不同金属的结合能力 | 第91-92页 |
| ·讨论 | 第92-95页 |
| 全文总结 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-114页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 个人简介 | 第116-117页 |
| 承诺书 | 第117-118页 |
