| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-23页 |
| ·生物传感器 | 第8-10页 |
| ·生物传感器简介 | 第8页 |
| ·生物传感器工作原理 | 第8-9页 |
| ·生物传感器分类 | 第9-10页 |
| ·酶传感器 | 第10-12页 |
| ·酶传感器特点 | 第10-11页 |
| ·酶传感器的应用 | 第11-12页 |
| ·酶试剂 | 第12-15页 |
| ·酶试剂特点与种类 | 第13页 |
| ·酶的固定化 | 第13-14页 |
| ·酶试剂及新型固定化方法研究意义 | 第14-15页 |
| ·丙酮酸氧化酶 | 第15-20页 |
| ·TPP家族酶 | 第15页 |
| ·丙酮酸氧化酶 | 第15-18页 |
| ·丙酮酸氧化酶的辅酶 | 第18-19页 |
| ·丙酮酸氧化酶催化机制 | 第19页 |
| ·丙酮酸氧化酶应用 | 第19-20页 |
| ·新型蛋白质固定化技术 | 第20-22页 |
| ·纤维素结合域(CBD)简介 | 第20-21页 |
| ·CBD来源和分类 | 第21页 |
| ·基于纤维素结合域的固定化技术 | 第21-22页 |
| ·本文的主要研究内容 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-39页 |
| ·实验材料 | 第23-26页 |
| ·基因来源,菌株及载体 | 第23页 |
| ·酶试剂及试剂盒 | 第23页 |
| ·主要实验试剂 | 第23-24页 |
| ·主要实验仪器设备 | 第24-25页 |
| ·培养基及相关溶液与试剂的配置 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-39页 |
| ·丙酮酸氧化酶基因的克隆及其在大肠杆菌中表达与纯化 | 第26-32页 |
| ·丙酮酸氧化酶的蛋白定量与酶活检测分析 | 第32-35页 |
| ·丙酮酸氧化酶与纤维素结合域CBD_(CEX)、CBM3的融合表达 | 第35-37页 |
| ·纤维素融合蛋白稳定性实验 | 第37页 |
| ·融合蛋白与纤维素结合效率实验 | 第37-39页 |
| 3 结果与讨论 | 第39-61页 |
| ·丙酮酸氧化酶的克隆、纯化与酶活分析 | 第39-47页 |
| ·丙酮酸氧化酶AVPOX-N的PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·丙酮酸氧化酶表达载体pET24d-AVPOX的构建和阳性克隆筛选 | 第40页 |
| ·丙酮酸氧化酶的诱导表达 | 第40-41页 |
| ·丙酮酸氧化酶的纯化 | 第41-43页 |
| ·丙酮酸氧化酶的蛋白定量 | 第43-44页 |
| ·丙酮酸氧化酶的酶活测定 | 第44-47页 |
| ·重组纤维素融合标签CBD_(CEX)、CBM3蛋白的克隆、纯化与酶活分析 | 第47-55页 |
| ·重组纤维素融合标签蛋白的载体构建 | 第47-48页 |
| ·重组纤维素融合标签蛋白的阳性克隆筛选 | 第48页 |
| ·重组纤维素融合标签蛋白诱导表达 | 第48-49页 |
| ·菌体生长曲线的测定 | 第49-50页 |
| ·重组纤维素融合标签蛋白的纯化 | 第50-52页 |
| ·重组纤维素融合标签蛋白定量 | 第52页 |
| ·重组纤维素融合标签蛋白酶活测定 | 第52-55页 |
| ·融合蛋白与纤维素结合效率 | 第55-61页 |
| 4 结论 | 第61-62页 |
| 5 展望 | 第62-63页 |
| 6 参考文献 | 第63-68页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第68-69页 |
| 8 致谢 | 第69-70页 |
| 9 附录 | 第70-82页 |
| 附录一：AVPOX-C序列 | 第70-71页 |
| 附录二：AVPOX-N序列 | 第71-73页 |
| 附录三：His-POX-CBD序列 | 第73-75页 |
| 附录四：POX-CBD-His序列 | 第75-77页 |
| 附录五：POX-CBM3-His序列 | 第77-80页 |
| 附录六：CBM3-POX-His序列 | 第80-82页 |
