Sox2基因对以蒙古绵羊间充质干细胞为供体的克隆胚早期发育影响的初步研究
| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 1 引言 | 第10-20页 |
| ·转基因技术 | 第10页 |
| ·转基因技术简介 | 第10页 |
| ·转基因技术研究进展 | 第10页 |
| ·转基因动物技术路线 | 第10-12页 |
| ·几种传统的转基因技术 | 第11-12页 |
| ·转基因克隆的意义与应用 | 第12-14页 |
| ·优良品种繁殖 | 第12-13页 |
| ·改善产品品质 | 第13-14页 |
| ·医学应用 | 第14页 |
| ·转基因技术存在的不足 | 第14-15页 |
| ·克隆成功率低 | 第14-15页 |
| ·早衰 | 第15页 |
| ·生物安全性 | 第15页 |
| ·转基因技术的应用前景 | 第15页 |
| ·Sox2基因 | 第15-18页 |
| ·Sox2基因概述 | 第15-16页 |
| ·Sox2蛋白及其序列特点 | 第16页 |
| ·Sox2基因的表达与调控 | 第16页 |
| ·Sox2蛋白促转录活性的调控 | 第16-17页 |
| ·Sox2基因在胚胎发育中的作用 | 第17-18页 |
| ·本研究的目的意义与主要研究内容 | 第18-20页 |
| 2 蒙古绵羊SOX2基因真核表达载体的构建 | 第20-32页 |
| ·实验材料 | 第20-21页 |
| ·生物材料 | 第20页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第20页 |
| ·溶液配制 | 第20页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-27页 |
| ·蒙古羊胎儿生殖腺组织RNA提取 | 第21页 |
| ·RNA分子完整性检测 | 第21-22页 |
| ·Sox2基因cDNA制备 | 第22页 |
| ·蒙古羊Sox2基因的克隆 | 第22-23页 |
| ·胶回收 | 第23-24页 |
| ·PSox2-EGFP真核表达载体的构建 | 第24-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-30页 |
| ·RNA完整性检测 | 第27页 |
| ·蒙古羊Sox2基因的扩增 | 第27-28页 |
| ·重组质粒菌落PCR的鉴定 | 第28页 |
| ·重组PSox2-EGFP酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组质粒PSox2-EGFP | 第29页 |
| ·去内毒素质粒PSox2-EGFP提取 | 第29-30页 |
| ·PSox2-EGFP载体线性化 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| 3 转SOX2基因间充质干细胞的筛选与鉴定 | 第32-43页 |
| ·实验材料 | 第32页 |
| ·实验生物材料 | 第32页 |
| ·实验试剂 | 第32页 |
| ·实验仪器及设备、耗材 | 第32页 |
| ·溶液配制 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-34页 |
| ·骨髓间充质细胞的解冻复苏 | 第32-33页 |
| ·骨髓间充质细胞的传代培养 | 第33页 |
| ·骨髓间充质细胞的毒性试验 | 第33页 |
| ·骨髓间充质干细胞的转染 | 第33-34页 |
| ·G418筛选细胞 | 第34页 |
| ·单克隆细胞的扩大培养 | 第34页 |
| ·转基因细胞的鉴定 | 第34-37页 |
| ·DNA水平上鉴定 | 第34-35页 |
| ·相对定量PCR检测 | 第35-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-41页 |
| ·转染胎儿骨髓间充质细胞 | 第37页 |
| ·单克隆的挑取及扩繁 | 第37-38页 |
| ·转基因细胞的鉴定 | 第38-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 4 克隆胚构建及发育 | 第43-48页 |
| ·实验材料 | 第43-44页 |
| ·生物材料 | 第43页 |
| ·实验试剂 | 第43页 |
| ·主要试剂的配制 | 第43页 |
| ·仪器与设备 | 第43-44页 |
| ·实验方法 | 第44-45页 |
| ·绵羊卵母细胞的成熟 | 第44页 |
| ·供体细胞转Sox2间充质细胞的准备 | 第44页 |
| ·克隆胚的构建 | 第44-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-47页 |
| ·绵羊卵母细胞的体外成熟 | 第45页 |
| ·克隆胚的构建 | 第45-46页 |
| ·克隆胚的体外发育分析 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 附录 | 第54-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
