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N~6-甲基腺嘌呤甲基转移酶新组分WTAP筛选及初步鉴定

致谢第1-6页
摘要第6-7页
Abstract第7-8页
专业词汇中英文对照表第8-10页
目录第10-13页
1 引言第13-21页
   ·表观遗传学第13页
   ·甲基化修饰第13-15页
     ·DNA甲基化第13-14页
     ·组蛋白甲基化第14页
     ·RNA甲基化第14-15页
   ·N~6-甲基腺苷酸(m~6A)第15-16页
   ·m~6A的去甲基化酶第16-17页
   ·m~6A的特异性甲基转移酶第17-19页
   ·m~6A的结合蛋白第19页
   ·METTL3互作蛋白的研究第19-21页
2 研究材料与方法第21-44页
   ·实验材料第21-27页
     ·质粒载体第21页
     ·菌株第21-22页
     ·细胞系第22页
     ·分子克隆工具酶第22页
     ·试剂盒及相关试剂第22-24页
     ·siRNA序列第24页
     ·引物第24-25页
     ·抗体第25页
     ·实验仪器第25-27页
   ·实验方法第27-34页
     ·主要实验试剂配制第27-34页
   ·实验方法第34-44页
     ·目的基因载体的构建第34-35页
     ·感受态的制备及质粒转化第35-36页
     ·细胞培养、传代及保存第36页
     ·siRNA沉默目的基因第36页
     ·质粒的瞬时转染第36-37页
     ·哺乳动物总蛋白的提取第37页
     ·原核蛋白的表达与纯化第37-41页
     ·GST pull down第41-42页
     ·免疫荧光技术第42页
     ·利用iRNA-FAM进行基因沉默第42页
     ·免疫共沉淀技术第42页
     ·用于质谱分析的蛋白样品制备第42-43页
     ·总RNA提取第43-44页
3 研究结果第44-55页
   ·METTL3的生物学功能初步探索第44页
   ·GST-METTL3融合蛋白纯化条件的优化第44-46页
     ·GST-METTL3融合蛋白可溶性条件的优化第44-45页
     ·利用凝胶层析法对GST-METTL3蛋白进行纯化第45-46页
   ·METTL3特异性抗体的制备及检测第46-48页
     ·His-METTL3蛋白纯化第46-47页
     ·从包涵体中提取His-METTL3融合蛋白第47-48页
   ·METTL3互作蛋白的筛选及鉴定第48-52页
     ·METTL3互作蛋白的筛选第48-49页
     ·METTL3互作蛋白的鉴定第49-50页
     ·METTL3和WTAP直接相互作用的证明第50-52页
   ·METTL3及其互作蛋白的细胞生物学水平的研究第52-55页
     ·METTL3及其互作蛋白在细胞内的定位第52-53页
     ·细胞内METTL3及其互作蛋白的表达对于其互作蛋白的影响第53-55页
4 结论及讨论第55-56页
参考文献第56-60页
作者简历及在学期间发表的学术论文与研究成果第60页

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