| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 插图和附表清单 | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1 粪肠球菌的生物学特性 | 第12页 |
| 2 粪肠球菌的致病性 | 第12-13页 |
| ·粪肠球菌对人的致病性 | 第12页 |
| ·肠球菌对动物的致病性 | 第12-13页 |
| 3 粪肠球菌的耐药性 | 第13-14页 |
| ·肠球菌固有耐药性 | 第13页 |
| ·肠球菌获得性耐药性 | 第13-14页 |
| 4 生物被膜相关因子 | 第14-18页 |
| ·初始黏附阶段有关因子 | 第14-15页 |
| ·肠球菌表面蛋白 | 第14-15页 |
| ·自溶素 | 第15页 |
| ·粪肠球菌胶原蛋白黏附素 | 第15页 |
| ·聚集阶段有关因子 | 第15-18页 |
| ·明胶酶 | 第15-17页 |
| ·聚集物质 | 第17页 |
| ·胞外DNA | 第17页 |
| ·胞外多糖 | 第17-18页 |
| ·生物被膜成熟阶段及影响因素 | 第18页 |
| 5 生物被膜形成的调控系统 | 第18-19页 |
| 6 生物信息学分析 | 第19页 |
| 7 本研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 鹅源粪肠球菌毒力因子gelE基因的克隆及序列分析 | 第20-33页 |
| 1 材料 | 第20页 |
| ·主要材料 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| 2 试验方法 | 第20-26页 |
| ·引物设计及合成 | 第20-21页 |
| ·粪肠球菌基因组的提取 | 第21页 |
| ·gelE基因PCR扩增及产物的回收 | 第21-23页 |
| ·gelE基因PCR扩增 | 第21-22页 |
| ·PCR产物的回收 | 第22-23页 |
| ·gelE基因与pMD18-T载体的连接反应 | 第23页 |
| ·CaCl_2法制备感受态细胞 | 第23页 |
| ·连接产物的转化 | 第23-24页 |
| ·重组质粒的提取及鉴定 | 第24-26页 |
| ·重组质粒的提取 | 第24页 |
| ·重组质粒PCR鉴定 | 第24页 |
| ·重组质粒单、双酶切鉴定 | 第24-26页 |
| ·重组质粒列测定与分析 | 第26页 |
| ·重组质粒序列测定与分析 | 第26页 |
| ·gelE基因核苷酸序列分析 | 第26页 |
| 3 试验结果 | 第26-31页 |
| ·gelE基因的PCR扩增结果 | 第26页 |
| ·重组质粒pMD18-T-gelE PCR鉴定结果 | 第26页 |
| ·pMD18-T-gelE重组质粒单双酶切鉴定结果 | 第26页 |
| ·基因测序结果 | 第26-30页 |
| ·gelE基因核苷酸序列分析结果 | 第30-31页 |
| 4 讨论 | 第31-32页 |
| ·构建克隆载体 | 第31页 |
| ·同源性比对 | 第31页 |
| ·gelE的作用机制 | 第31-32页 |
| 5 结论 | 第32-33页 |
| 第三章 鹅源粪肠球菌gelE基因的原核表达及蛋白检测 | 第33-41页 |
| 1 材料 | 第33页 |
| ·主要材料 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| 2 试验方法 | 第33-38页 |
| ·双酶切产物的连接 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌BL21感受态细胞制备 | 第34-35页 |
| ·连接产物转化 | 第35页 |
| ·重组表达质粒的提取 | 第35-36页 |
| ·重组表达质粒的PCR及酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组表达质粒PCR鉴定 | 第36页 |
| ·重组表达质粒单、双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·gelE重组蛋白的诱导表达 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE鉴定 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-39页 |
| ·gelE基因重组表达载体pET-28a-gelE的鉴定 | 第38-39页 |
| ·gelE蛋白SDS-PAGE检测结果 | 第39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| ·明胶酶蛋白的致病机制 | 第39-40页 |
| ·表达载体及宿主菌的选择 | 第40页 |
| ·明胶酶蛋白的诱导表达 | 第40页 |
| 5 结论 | 第40-41页 |
| 第四章 鹅源粪肠球菌毒力因子gelE基因的生物信息学分析 | 第41-52页 |
| 1 材料 | 第41页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·生物信息学软件和网络服务器 | 第41页 |
| ·生物信息学软件 | 第41页 |
| ·在线分析的主要网站 | 第41页 |
| 2 方法 | 第41-43页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白序系统进化分析 | 第41-42页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白序列理化性质分析 | 第42页 |
| ·鹅源粪肠球菌毒力因子gelE蛋白序列结构的预测 | 第42页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白序列一级结构的预测 | 第42页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白序列二级结构的预测 | 第42页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白序列三级结构的预测 | 第42页 |
| ·鹅源粪肠球菌毒力因子gelE蛋白抗原表位的预测 | 第42-43页 |
| ·鹅源粪肠球菌毒力因子gelE蛋白可塑性区域预测 | 第42页 |
| ·鹅源粪肠球菌毒力因子gelE蛋白亲水性区域的预测 | 第42页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白抗原性指数的预测 | 第42页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白表面可及性区域的预测 | 第42-43页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白潜在抗原表位综合预测 | 第43页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE mRNA二级结构的预测 | 第43页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE mRNA蛋白在亚细胞的定位预测 | 第43页 |
| 3 结果 | 第43-50页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白序系统进化分析结果 | 第43-44页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白序列的理化性质分析结果 | 第44页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白结构 | 第44-47页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白一级结构 | 第44-46页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白二级结构 | 第46-47页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白三级结构 | 第47页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白抗原表位预测结果 | 第47-49页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白的可塑性区域 | 第47-48页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白的亲水性区域预测 | 第48页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白的AI预测 | 第48页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白的表面可及性预测 | 第48-49页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白抗原表位综合预测 | 第49-50页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE mRNA二级结构 | 第50页 |
| ·鹅源粪肠球菌gelE蛋白在亚细胞的定位 | 第50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| ·表位疫苗的分析 | 第50-51页 |
| ·抗原表位的预测 | 第51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 导师简介 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58-59页 |
