| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 英文缩略表 | 第15-17页 |
| 单位 | 第17-18页 |
| 第一部分 文献综述 | 第18-36页 |
| 第一章 斯钙素1研究进展 | 第18-26页 |
| ·STC发现历程 | 第18-19页 |
| ·鱼类STC | 第19-20页 |
| ·基因表达调节 | 第19页 |
| ·STC靶器官和作用机制 | 第19-20页 |
| ·STC家族 | 第20-21页 |
| ·哺乳动物STC-1的发现 | 第20页 |
| ·哺乳动物STC-1表达和分布 | 第20-21页 |
| ·哺乳动物STC-1生理功能 | 第21-23页 |
| ·转基因和基因敲除研究 | 第21页 |
| ·Ca~(2+)/Pi稳态的调节 | 第21-22页 |
| ·对动物发育和亚细胞功能的作用 | 第22-23页 |
| ·斯钙素和癌症 | 第23-25页 |
| ·斯钙素和癌症的关系 | 第23页 |
| ·STC-1在血管生成、细胞增殖和凋亡中的作用 | 第23-24页 |
| ·STC-1和肿瘤微环境 | 第24-25页 |
| ·总结 | 第25-26页 |
| 第二章 钙离子转运概述 | 第26-33页 |
| ·机体Ca~(2+)代谢 | 第26页 |
| ·机体Ca~(2+)调节 | 第26-27页 |
| ·机体Ca~(2+)转运概述 | 第27-33页 |
| ·细胞旁路转运途径 | 第27-29页 |
| ·跨细胞转运 | 第29-33页 |
| 第三章 新型钙离子通道研究进展 | 第33-36页 |
| ·TRPV5和TRPV6 | 第33-34页 |
| ·上皮细胞TRPV5和TRPV6分布 | 第33页 |
| ·TRPV5和TRPV6的分子特征 | 第33-34页 |
| ·Calbindin-D_(28K)和Calbindin-D_(9K) | 第34-35页 |
| ·NCX和PMCA | 第35-36页 |
| 第二部分 试验研究 | 第36-110页 |
| 第四章 原核表达牛源斯钙素1重组蛋白研究 | 第36-52页 |
| 摘要 | 第36页 |
| Abstract | 第36页 |
| ·研究背景 | 第36-37页 |
| ·材料和方法 | 第37-46页 |
| ·实验动物 | 第37页 |
| ·试验材料和试剂 | 第37-39页 |
| ·克隆奶牛斯钙素1基因 | 第39-41页 |
| ·扩增产物的TA克隆 | 第41-44页 |
| ·构建STC-1原核表达载体 | 第44-45页 |
| ·STC-1融合蛋白诱导表达 | 第45-46页 |
| ·结果 | 第46-50页 |
| ·STC-1基因的扩增和克隆 | 第46-47页 |
| ·RCR和酶切检测重组质粒pMD18-STC-1和pET-STC-1 | 第47-48页 |
| ·重组质粒pET-STC-1 DNA测序 | 第48-49页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析表达产物 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 斯钙素1蛋白在奶牛胃肠道差异性表达情况研究 | 第52-67页 |
| 摘要 | 第52页 |
| Abstract | 第52-53页 |
| ·研究背景 | 第53-54页 |
| ·材料与方法 | 第54-59页 |
| ·实验动物 | 第54页 |
| ·实验试剂 | 第54-55页 |
| ·仪器设备 | 第55-56页 |
| ·半定量Real-time PCR | 第56-57页 |
| ·细胞蛋白提取及蛋白含量测定 | 第57-58页 |
| ·免疫印迹分析 | 第58-59页 |
| ·数据分析 | 第59页 |
| ·结果 | 第59-63页 |
| ·STC-1基因的扩增曲线和融解曲线 | 第59-60页 |
| ·总蛋白浓度测定 | 第60-62页 |
| ·STC-1基因在奶牛胃肠道和肾脏的表达情况 | 第62-63页 |
| ·STC-1蛋白在奶牛胃肠道和肾脏的表达情况 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-67页 |
| 第六章 新生牛小肠上皮细胞培养方法建立 | 第67-82页 |
| 摘要 | 第67页 |
| Abstract | 第67-68页 |
| ·前言 | 第68-69页 |
| ·材料和方法 | 第69-75页 |
| ·实验试剂 | 第69页 |
| ·主要试验仪器和设备 | 第69-70页 |
| ·无菌操作 | 第70-71页 |
| ·分离小肠上皮细胞 | 第71-72页 |
| ·纯化小肠上皮细胞 | 第72-73页 |
| ·小肠上皮细胞形态学观察 | 第73页 |
| ·鉴定小肠上皮细胞 | 第73-74页 |
| ·PCR | 第74-75页 |
| ·结果 | 第75-79页 |
| ·上皮细胞形态学观察 | 第75-76页 |
| ·电镜和染色观察上皮细胞 | 第76-77页 |
| ·免疫细胞化学鉴定上皮细胞 | 第77-78页 |
| ·PCR鉴定上皮细胞 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-82页 |
| 第七章 斯钙素1对过氧化氢诱导的奶牛肠道上皮细胞损伤的保护作用研究 | 第82-96页 |
| 摘要 | 第82页 |
| Abstract | 第82-83页 |
| ·研究背景 | 第83-84页 |
| ·材料和方法 | 第84-88页 |
| ·实验试剂和材料 | 第84-85页 |
| ·主要仪器 | 第85页 |
| ·新生牛小肠上皮细胞培养 | 第85-86页 |
| ·构建pcDNA-STC-1重组质粒的 | 第86页 |
| ·细胞处理 | 第86-87页 |
| ·吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染色 | 第87页 |
| ·细胞存活率检测 | 第87页 |
| ·Real-timePCR基因表达分析 | 第87-88页 |
| ·Westem blotting | 第88页 |
| ·数据分析 | 第88页 |
| ·实验结果 | 第88-93页 |
| ·转染细胞中STC-1表达情况 | 第88-89页 |
| ·H_2O_2诱导的细胞损伤 | 第89-90页 |
| ·H_2O_2诱导的细胞死亡 | 第90-91页 |
| ·H_2O_2诱导的STC-1表达 | 第91页 |
| ·STC-1超表达对H_2O_2诱导的损伤的作用 | 第91-92页 |
| ·STC-1超表达对凋亡相关蛋白表达的作用 | 第92-93页 |
| ·讨论 | 第93-96页 |
| 第八章 斯钙素1对Caco_2细胞新型钙离子转运蛋白调节作用研究 | 第96-110页 |
| 摘要 | 第96页 |
| Abstract | 第96-97页 |
| ·研究背景 | 第97-99页 |
| ·材料和方法 | 第99-104页 |
| ·试验材料和试剂 | 第99-100页 |
| ·细胞培养 | 第100-101页 |
| ·构建重组表达质粒pIRES-STC-1 | 第101页 |
| ·STC-1基因siRNA设计和合成 | 第101-102页 |
| ·细胞处理和重组质粒和siRNA转染 | 第102页 |
| ·Real-time PCR | 第102-104页 |
| ·Western blotting | 第104页 |
| ·数据分析 | 第104页 |
| ·结果 | 第104-108页 |
| ·转染后Caco2细胞中STC-1表达情况 | 第104-105页 |
| ·STC-1超表达对Ca~(2+)转运蛋白的影响 | 第105-106页 |
| ·STC-1表达抑制对Ca~(2+)转运蛋白的影响 | 第106-108页 |
| ·讨论 | 第108-110页 |
| 参考文献 | 第110-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
| 附录 | 第132-135页 |
