| 附件 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-28页 |
| ·EMCV 分类 | 第17-18页 |
| ·EMCV 理化特征 | 第18页 |
| ·EMCV 分子生物学特征 | 第18-19页 |
| ·EMCV 致病性及临床症状 | 第19-22页 |
| ·EMCV 致病性 | 第19-20页 |
| ·EMCV 感染的临床症状 | 第20-22页 |
| ·EMCV 流行情况 | 第22-23页 |
| ·EMCV 毒株分离及鉴定 | 第23-25页 |
| ·EMCV 诊断和检测方法 | 第25-26页 |
| ·EMCV 的预防 | 第26-27页 |
| ·本研究意义 | 第27-28页 |
| 第二章 脑心肌炎病毒双抗原夹心 ELISA 建立 | 第28-41页 |
| ·材料和仪器设备 | 第28-29页 |
| ·主要试剂和材料 | 第28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28-29页 |
| ·EMCV VP2 引物 | 第29页 |
| ·方法和步骤 | 第29-32页 |
| ·EMCV VP2 重组蛋白表达和纯化 | 第29-31页 |
| ·各组分最适浓度优化 | 第31页 |
| ·最佳反应时间优化 | 第31-32页 |
| ·组装试剂盒，确定说明书 | 第32页 |
| ·试剂盒质量检测 | 第32页 |
| ·与间接法 ELISA 比较 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-39页 |
| ·VP2 基因的 PCR 扩增 | 第32-33页 |
| ·PCR 产物和载体双酶切 | 第33页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第33页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第33-34页 |
| ·Western-blot 分析 | 第34页 |
| ·最适包被浓度确定 | 第34-35页 |
| ·最适封闭液浓度确定 | 第35页 |
| ·最适酶标抗原浓度确定 | 第35-36页 |
| ·样品最佳反应时间优化 | 第36页 |
| ·酶标抗原最佳作用时间优化 | 第36页 |
| ·最佳显色时间优化 | 第36-37页 |
| ·试剂盒说明书 | 第37-38页 |
| ·试剂盒稳定性 | 第38页 |
| ·试剂盒特异性 | 第38页 |
| ·试剂盒精密性 | 第38-39页 |
| ·与间接法 ELISA 法比较 | 第39页 |
| ·小结 | 第39-41页 |
| 第三章 脑心肌炎病毒血清学调查 | 第41-53页 |
| ·材料和仪器设备 | 第41-43页 |
| ·血清样本 | 第41-42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42-43页 |
| ·方法和步骤 | 第43页 |
| ·样品处理 | 第43页 |
| ·样品检测 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-51页 |
| ·全国各地区人感染 EMCV 血清学调查 | 第43-47页 |
| ·特定人群 EMCV 流行病学调查 | 第47-48页 |
| ·全国各地区猪感染 EMCV 流行病学调查 | 第48-50页 |
| ·固定猪群动态监测 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-53页 |
| 第四章 脑心肌炎病毒甘肃毒株 GS01 分离鉴定 | 第53-67页 |
| ·材料和仪器设备 | 第53-55页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·细胞、菌株和质粒 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·主要仪器设备 | 第53-54页 |
| ·引物 | 第54-55页 |
| ·方法和步骤 | 第55-58页 |
| ·病料处理 | 第55页 |
| ·细胞接种 | 第55页 |
| ·RT-PCR 检测 | 第55-57页 |
| ·分离病毒鉴定 | 第57-58页 |
| ·基因序列测定和分析 | 第58页 |
| ·结果与分析 | 第58-66页 |
| ·病毒的分离培养 | 第58页 |
| ·PCR 检测结果 | 第58-59页 |
| ·测序结果及分析 | 第59页 |
| ·病毒 TCID50测定 | 第59页 |
| ·琼脂扩散结果 | 第59-60页 |
| ·荧光定量 PCR 结果 | 第60页 |
| ·病毒对小鼠致病性结果 | 第60-61页 |
| ·基因全序测定及分析 | 第61-66页 |
| ·Genbank 提交 | 第66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 第五章 RNAI 靶向 VP1 基因抑制脑心肌炎病毒复制 | 第67-76页 |
| ·材料和仪器设备 | 第67-68页 |
| ·细胞及毒株 | 第67页 |
| ·主要试剂 | 第67-68页 |
| ·主要仪器设备 | 第68页 |
| ·引物 | 第68页 |
| ·方法和步骤 | 第68-71页 |
| ·siRNA 序列的设计、合成和构建重组表达质粒 | 第68-69页 |
| ·重组质粒转染 BHK-21 细胞 | 第69页 |
| ·RNAi 抑制 EMCV 病毒复制 | 第69-70页 |
| ·病毒感染力测定（TCID50） | 第70页 |
| ·荧光定量检测病毒基因复制情况 | 第70页 |
| ·shRNA 特异性验证 | 第70页 |
| ·shRNA 对真核表达载体 pEGFP-VP1 表达抑制情况 | 第70-71页 |
| ·结果与分析 | 第71-75页 |
| ·shRNA 重组质粒转染 BHK-21 细胞情况 | 第71-72页 |
| ·RNAi 抑制病毒复制效果观察 | 第72-73页 |
| ·病毒感染力测定（TCID50）测定结果 | 第73页 |
| ·荧光定量检测分析 | 第73-74页 |
| ·X109-2 组对乙型脑炎病毒、口蹄疫病毒复制作用 | 第74页 |
| ·对 X109-2 和 pEGFP–C1-VP1 质粒共转 CHO-K1 | 第74-75页 |
| ·小结 | 第75-76页 |
| 第六章 全文结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-86页 |
| 附录 | 第86-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 作者简历 | 第91页 |
