| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 主要符号说明 | 第6-14页 |
| 第一章 综述 | 第14-31页 |
| ·土壤污染 | 第14-16页 |
| ·土壤重金属污染现状及危害 | 第14-15页 |
| ·有机物污染现状及危害 | 第15-16页 |
| ·土壤修复方法 | 第16-24页 |
| ·物理修复法 | 第16-17页 |
| ·化学修复法 | 第17页 |
| ·生物修复法 | 第17-18页 |
| ·微生物修复 | 第18页 |
| ·植物修复 | 第18页 |
| ·植物修复研究进展 | 第18-24页 |
| ·植物修复重金属污染 | 第18-20页 |
| ·植物修复有机物污染 | 第20-21页 |
| ·转基因植物修复重金属污染和有机物污染的研究进展 | 第21-23页 |
| ·植物修复发展前景 | 第23-24页 |
| ·转基因紫花苜蓿研究进展 | 第24-28页 |
| ·构建转基因苜蓿的常用方法 | 第24-26页 |
| ·聚乙二醇(PEG)介导的转化 | 第24-25页 |
| ·电激法 | 第25页 |
| ·基因枪转化 | 第25页 |
| ·显微注射法 | 第25页 |
| ·超声波介导的转化 | 第25页 |
| ·农杆菌介导的转化 | 第25-26页 |
| ·超声波辅助农杆菌介导的转化 | 第26页 |
| ·苜蓿遗传转化研究进展 | 第26-28页 |
| ·品种改良 | 第26-27页 |
| ·转抗寒及抗旱基因苜蓿 | 第27页 |
| ·转抗病虫害基因苜蓿 | 第27页 |
| ·转耐盐性基因苜蓿 | 第27页 |
| ·转抗除草剂基因苜蓿 | 第27-28页 |
| ·转修复土壤污染基因苜蓿 | 第28页 |
| ·研究目的及意义 | 第28-31页 |
| ·阿尔冈金紫花苜蓿简介 | 第28-29页 |
| ·目的基因AtATM3和CYP2E1简介 | 第29-30页 |
| ·本课题的目的和意义 | 第30-31页 |
| 第二章 含有AtATM3和CYP2E1双质粒农杆菌的转化 | 第31-54页 |
| ·实验材料 | 第31-34页 |
| ·菌种及质粒 | 第31页 |
| ·仪器及设备 | 第31-32页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第32-34页 |
| ·主要试剂 | 第32-33页 |
| ·主要溶液的配制 | 第33-34页 |
| ·主要培养基成分和配制方法 | 第34页 |
| ·酶及引物 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-44页 |
| ·CYP2E1基因植物表达载体的构建 | 第34-41页 |
| ·载体质粒的保存 | 第35-38页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·质粒转化大肠杆菌 | 第35页 |
| ·质粒DNA的小量提取(碱裂解法) | 第35-36页 |
| ·筛选阳性克隆 | 第36-38页 |
| ·引物设计与PCR验证 | 第36-37页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第37-38页 |
| ·冰箱冷冻保存 | 第38页 |
| ·克隆载体pMD18-T-CYP2E1的构建、转化及筛选 | 第38-40页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·质粒的小量提取 | 第38页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第38页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第38页 |
| ·PCR产物胶回收(利用胶回收试剂盒) | 第38-39页 |
| ·PCR回收片段与pMD18-T载体的连接 | 第39页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态 | 第39页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第39页 |
| ·重组质粒的转化 | 第39页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第39-40页 |
| ·蓝白斑筛选阳性克隆 | 第39页 |
| ·小量提取阳性克隆质粒 | 第39页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定 | 第39页 |
| ·阳性克隆的双酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·阳性克隆测序 | 第40页 |
| ·植物双元表达载体pBI121-CYP2E1的构建 | 第40-41页 |
| ·表达质粒pBI121 DNA片段的获得 | 第40页 |
| ·质粒pBI121的双酶切 | 第40页 |
| ·目的片段胶回收 | 第40页 |
| ·CYP2E1基因片段的获得 | 第40-41页 |
| ·克隆载体pMD18-T-CYP2E1的双酶切 | 第40-41页 |
| ·目的片段胶回收 | 第41页 |
| ·表达载体pBI121-CYP2E1的构建 | 第41页 |
| ·目的片段的连接 | 第41页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌DH5α | 第41页 |
| ·重组质粒pBI121-CYP2E1的提取鉴定 | 第41页 |
| ·含有pCambia1302-AtATM3和pBI121-CYP2E1双质粒农杆菌的转化 | 第41-44页 |
| ·含有pCambia1302-AtATM3和pBI121-CYP2E1单质粒农杆菌的转化 | 第41-42页 |
| ·农杆菌LBA4404感受态的制备 | 第41-42页 |
| ·冻融法将pCambia1302-AtATM3和pBI121-CYP2E1分别转化入农杆菌LBA4404感受态 | 第42页 |
| ·农杆菌转化子的鉴定与保存 | 第42页 |
| ·农杆菌转化子质粒DNA的提取 | 第42页 |
| ·PCR鉴定 | 第42页 |
| ·农杆菌转化子的保存 | 第42页 |
| ·含有pCambia1302-AtATM3和pBI121-CYP2E1双质粒农杆菌的转化 | 第42-44页 |
| ·含pBI121-CYP2E1质粒农杆菌LBA4404感受态的制备 | 第42-43页 |
| ·冻融法将pCambia1302-AtATM3转化入含pBI121-CYP2E1的感受态农杆菌LBA4404 | 第43页 |
| ·农杆菌转化子的鉴定与保存 | 第43页 |
| ·转化子的生长周期 | 第43页 |
| ·培养时间对双质粒共存的影响 | 第43-44页 |
| ·生长时间对双质粒保存的影响 | 第43页 |
| ·继代次数对双质粒保存的影响 | 第43-44页 |
| ·实验结果 | 第44-50页 |
| ·CYP2E1基因植物表达载体的构建 | 第44-46页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第44页 |
| ·PCR扩增 | 第44页 |
| ·PCR产物与T载体连接,蓝白斑筛选重组子 | 第44-45页 |
| ·重组质pMD18-T-CYP2E1的鉴定 | 第45页 |
| ·质粒DNA测序鉴定 | 第45页 |
| ·植物双元表达载体pBI121-CYP2E1的构建及鉴定 | 第45-46页 |
| ·含有AtATM3和CYP2E1双质粒农杆菌的转化 | 第46-50页 |
| ·含质粒农杆菌的PCR鉴定 | 第46-47页 |
| ·含pCambia302-AtATM3质粒农杆菌的PCR鉴定 | 第47页 |
| ·含pCambia302-AtATM3和pBI121-CYP2E1双质粒农杆菌的PCR鉴定.. | 第47-49页 |
| ·含pCambia1302-AtATM3和pBI121-CYP2E1双质粒的农杆菌的生长周期 | 第49-50页 |
| ·培养时间对pCambia1302-AtATM3和pBI121-CYP2E1双质粒共存的影响 | 第50页 |
| 4 分析与讨论 | 第50-54页 |
| 第三章 紫花苜蓿再生体系的构建与优化 | 第54-65页 |
| ·实验材料 | 第54-57页 |
| ·外植体材料 | 第54页 |
| ·仪器及设备 | 第54页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第54-57页 |
| ·试剂 | 第54-55页 |
| ·主要溶液的配制 | 第55-57页 |
| ·实验方法 | 第57-59页 |
| ·无菌苗的获得 | 第57页 |
| ·愈伤组织的培养 | 第57-58页 |
| ·苗龄对愈伤出愈的影响实验 | 第57页 |
| ·外植体对Kan的耐受力试验 | 第57页 |
| ·外植体对Amp的敏感性试验 | 第57页 |
| ·不同激素对愈伤组织分化的影响 | 第57-58页 |
| ·不同植物生长调节剂配比对分化率的影响及分化情况 | 第58页 |
| ·农杆菌浸染外植体 | 第58页 |
| ·共培养 | 第58页 |
| ·紫花苜蓿愈伤组织的脱菌筛选培养 | 第58页 |
| ·愈伤组织的继代培养 | 第58页 |
| ·愈伤组织分化增殖 | 第58页 |
| ·无根苗的生根诱导 | 第58-59页 |
| ·实验结果 | 第59-64页 |
| ·无菌苗的培养 | 第59页 |
| ·单因素实验结果 | 第59-63页 |
| ·苗龄对芽再生的影响 | 第59页 |
| ·Kan浓度对愈伤组织的影响 | 第59-61页 |
| ·Amp浓度对愈伤组织的影响 | 第61-62页 |
| ·不同激素浓度对诱导胚性愈伤组织的影响 | 第62页 |
| ·不同生长调剂剂浓度对诱导胚性愈伤组织的影响 | 第62-63页 |
| ·无菌苗的获得 | 第63-64页 |
| ·分析与讨论 | 第64-65页 |
| 第四章 转基因植株的分子检测及功能鉴定 | 第65-80页 |
| ·实验材料 | 第65-66页 |
| ·仪器及设备 | 第65页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第65-66页 |
| ·引物(上海博尚生物合成) | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-69页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第66-69页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第66-68页 |
| ·转基因紫花苜蓿基因组DNA提取 | 第66-67页 |
| ·PCR检测 | 第67-68页 |
| ·转基因植株的RT-PCR检测 | 第68-69页 |
| ·转基因紫花苜蓿总RNA的提取 | 第68页 |
| ·RT-PCR检测 | 第68-69页 |
| ·植物的生长与耐受实验 | 第69页 |
| ·野生型苜蓿幼苗对重金属和有机物的耐受实验 | 第69页 |
| ·转基因植株对重金属和有机物的耐受实验 | 第69页 |
| ·实验结果 | 第69-78页 |
| ·转基因紫花苜蓿基因组DNA的提取 | 第69-70页 |
| ·PCR检测转基因紫花苜蓿 | 第70-72页 |
| ·转基因紫花苜蓿总RNA的提取 | 第72页 |
| ·转基因紫花苜蓿的RT-PCR检测 | 第72-74页 |
| ·幼苗对重金属和有机物的耐受实验 | 第74-75页 |
| ·幼苗对重金属的耐受实验 | 第74页 |
| ·幼苗对有机物的耐受实验 | 第74-75页 |
| ·成熟植株对重金属和有机物的耐受实验 | 第75-78页 |
| ·成熟植株对重金属的耐受实验 | 第75-76页 |
| ·成熟植株对有机物的耐受实验 | 第76-77页 |
| ·成熟植株对重金属和有机物复合污染的耐受实验 | 第77-78页 |
| ·分析与讨论 | 第78-80页 |
| 全文结论 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第89-90页 |
