| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 综述 | 第11-23页 |
| 一、禽致病性大肠杆菌的研究进展 | 第11-18页 |
| 1. 禽大肠杆菌病概述 | 第11-12页 |
| ·症状及病理变化 | 第11页 |
| ·流行特点和防治措施 | 第11-12页 |
| 2. 禽致病性大肠杆菌的主要毒力因子 | 第12-17页 |
| ·黏附素 | 第12-14页 |
| ·Ⅰ型菌毛 | 第13页 |
| ·P型菌毛 | 第13页 |
| ·Curli菌毛 | 第13-14页 |
| ·摄铁系统 | 第14-15页 |
| ·铁系统(Ironsystem) | 第14页 |
| ·耶尔森菌强毒力岛(Yersinia High pathogeneeity island,HPI) | 第14-15页 |
| ·外膜蛋白 | 第15页 |
| ·荚膜 | 第15-16页 |
| ·脂多糖 | 第16页 |
| ·血清抗性蛋白(Increased serum survivalgene,Iss) | 第16页 |
| ·侵袭素 | 第16-17页 |
| ·温度敏感性血凝素 | 第17页 |
| 3. 禽致病性大肠杆菌的致病机理 | 第17-18页 |
| 二、肠炎沙门氏菌研究进展 | 第18-23页 |
| 1. 肠炎沙门氏菌病概述 | 第18-19页 |
| ·症状及病理变化 | 第18页 |
| ·流行特点和防治措施 | 第18-19页 |
| 2. 肠炎沙门氏菌的主要毒力因子 | 第19-21页 |
| ·沙门氏菌毒力岛 | 第19-20页 |
| ·菌毛 | 第20页 |
| ·外膜蛋白 | 第20页 |
| ·脂多糖 | 第20-21页 |
| 3. 肠炎沙门氏菌的致病机理 | 第21-23页 |
| ·肠炎沙门氏菌感染与宿主细胞的关系 | 第21页 |
| ·宿主对肠炎沙门氏菌的防御能力 | 第21-23页 |
| 引言 | 第23页 |
| 1 材料 | 第23-26页 |
| ·菌株和质粒 | 第23-25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·分子生物学及数据分析软件 | 第26页 |
| ·试验鸡及试验鸡胚 | 第26页 |
| 2 方法 | 第26-37页 |
| ·pT-ompA1-Zeo、pT-ompT-Cam、pT-ompA2-Kan和pT-pgtE-Cam重组质粒的构建 | 第26-30页 |
| ·ompA、ompT、pgtE基因的扩增 | 第26-27页 |
| ·pT-ompA1、pT-ompT、pT-ompA2、pT-pgtE质粒的构建 | 第27-28页 |
| ·将抗性基因克隆入重组质粒 | 第28-30页 |
| ·E058△ompA、E058△ompT、CVCC3378△ompA以及CVCC3378△pgtE突变株的构建 | 第30-32页 |
| ·制备电转化感受态细胞 | 第30-31页 |
| ·质粒pKD46的转化 | 第31页 |
| ·Red重组功能的诱导及感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·电转化 | 第31-32页 |
| ·消除pKD46质粒 | 第32页 |
| ·RT-PCR | 第32-34页 |
| ·提取细菌RNA | 第32页 |
| ·DNA的去除反应 | 第32页 |
| ·反转录反应 | 第32-33页 |
| ·cDNA的PCR鉴定 | 第33-34页 |
| ·突变株的回复拯救试验 | 第34-35页 |
| ·完整基因片段的扩增 | 第34页 |
| ·重组质粒pGEX-6p-1-ompA1、pGEX-6p-1-ompT、pGEX-6p-1-ompA2以及pGEX-6p-1-pgtE的构建 | 第34-35页 |
| ·回复拯救株的获得 | 第35页 |
| ·细菌生长曲线的测定 | 第35页 |
| ·E058△ompA、E058△ompT、CVCC3378△ompA和CVCC3378△pgtE突变株的致病性评价 | 第35-37页 |
| ·鸡巨噬细胞HD-11吞噬试验 | 第35页 |
| ·SPF鸡血清杀菌试验 | 第35-36页 |
| ·1日龄小鸡致死试验 | 第36页 |
| ·体内外竞争试验 | 第36页 |
| ·动态分布试验 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-54页 |
| ·E058△ompA、E058△ompT、CVCC3378△ompA以及CVCC3378△pgtE突变株的构建 | 第37-41页 |
| ·ompA、ompT、pgtE片段的克隆及鉴定 | 第37页 |
| ·重组质粒pT-ompA1、pT-ompT、pT-ompA2、pT-pgtE的构建 | 第37-38页 |
| ·带抗性基因的重组质粒pT-ompA1-Zeo、pT-ompT-Cat、pT-ompA2-Kan和pT-pgtE-Cat的构建 | 第38-41页 |
| ·突变株E058△ompA、E058△ompT、CVCC3378△ompA以及CVCC3378△pgtE的鉴定 | 第41-43页 |
| ·突变株E058△ompA的PCR鉴定结果 | 第41页 |
| ·突变株E058△ompT的PCR鉴定结果 | 第41-42页 |
| ·突变株CVCC3378△ompA的PCR鉴定结果 | 第42页 |
| ·突变株CVCC3378△pgtE的PCR鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·RT-PCR结果 | 第43-46页 |
| ·突变株E058△ompA的RT-PCR结果 | 第43-44页 |
| ·突变株E058△ompT的RT-PCR结果 | 第44页 |
| ·突变株CVCC3378△ompA的RT-PCR结果 | 第44-45页 |
| ·突变株CVCC3378△pgtE的RT-PCR结果 | 第45-46页 |
| ·突变株的回复拯救结果 | 第46-48页 |
| ·细菌生长曲线测定结果 | 第48-49页 |
| ·E058及其突变株的生长曲线 | 第48页 |
| ·CVCC3378及其突变株的生长曲线 | 第48-49页 |
| ·突变株的致病性评价试验 | 第49-54页 |
| ·HD-11细胞吞噬试验结果 | 第49页 |
| ·SPF鸡血清杀菌试验结果 | 第49页 |
| ·1日龄小鸡致死试验 | 第49-50页 |
| ·体外和体内竞争结果 | 第50-52页 |
| ·体外竞争结果 | 第50页 |
| ·体内竞争结果 | 第50-52页 |
| ·35日龄SPF鸡体内动态分布试验结果 | 第52-54页 |
| 4 讨论 | 第54-57页 |
| 全文小结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
