| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 主要英文缩写对照 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| 综述一 捻转血矛线虫及Hc38基因研究进展 | 第11-15页 |
| 1 捻转血矛线虫概述 | 第11-14页 |
| ·病原学 | 第11页 |
| ·生活史 | 第11-12页 |
| ·流行病学 | 第12-13页 |
| ·临床症状和病理变化 | 第13页 |
| ·诊断 | 第13-14页 |
| ·预防 | 第14页 |
| 2 Hc38基因研究进展 | 第14-15页 |
| 综述二 毕赤酵母表达外源基因的研究进展 | 第15-25页 |
| 1 毕赤酵母表达系统的优点 | 第15-16页 |
| 2 毕赤酵母的生物学特性 | 第16页 |
| 3 毕赤酵母表达载体及元件 | 第16-18页 |
| ·表达载体 | 第16-17页 |
| ·启动子 | 第17-18页 |
| ·信号肽序列 | 第18页 |
| ·选择标记 | 第18页 |
| 4 毕赤酵母的宿主菌 | 第18-19页 |
| 5 毕赤酵母的转化及重组整合 | 第19-21页 |
| ·质粒在AOXI或aoxl::ARG4位点的插入[59] | 第19-20页 |
| ·质粒在his4位点的插入 | 第20-21页 |
| ·质粒在AOXl位点的置换 | 第21页 |
| 6 影响毕赤酵母表达外源基因的因素 | 第21-25页 |
| ·外源基因自身特性 | 第21-22页 |
| ·培养条件的影响 | 第22-23页 |
| ·载体菌株 | 第23页 |
| ·产物稳定性 | 第23-25页 |
| 第二章 实验部分 | 第25-49页 |
| 实验一 捻转血矛线虫Hc38基因保守结构域在毕赤酵母中的表达 | 第25-40页 |
| 摘要 | 第25-26页 |
| 1 材料和方法 | 第26-34页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-30页 |
| ·电转化及重组酵母的筛选鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组酵母菌株的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析[83] | 第32-33页 |
| ·HcP表达产物的纯化[84] | 第33页 |
| ·纯化产物反应原性的鉴定 | 第33-34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-38页 |
| ·HcP基因的扩增、克隆及测序 | 第34-35页 |
| ·重组表达载体pPIC9K-HcP的构建及PCR和双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组酵母菌株GS115/pPIC9K-HcP的鉴定 | 第36页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测 | 第36-37页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| ·纯化产物反应原性鉴定 | 第38页 |
| 3 讨论 | 第38-40页 |
| ·载体pPIC9K-HcP的构建 | 第38页 |
| ·重组酵母表达株的筛选 | 第38页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中表达的影响因素 | 第38-40页 |
| 实验二 重组蛋白的生物学特性初探 | 第40-49页 |
| 摘要 | 第40页 |
| 1 材料和方法 | 第40-43页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-47页 |
| ·HcP表达产物的红血球凝集活性 | 第43-45页 |
| ·HcP表达产物对羊的血红蛋白的降解活性 | 第45-46页 |
| ·HcP表达产物对羊的IgG的降解作用 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| ·HcP蛋白的红血球凝集活性 | 第47-48页 |
| ·HcP蛋白降解血红蛋白的活性 | 第48页 |
| ·HcP蛋白降解免疫球蛋白(IgG)的活性 | 第48-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 创新点 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附录 | 第56-60页 |
| 作者简介 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 导师评阅表 | 第62页 |
