| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语 | 第11-14页 |
| 20种常见氨基酸 | 第14-17页 |
| 目次 | 第17-20页 |
| 1 引言 | 第20-37页 |
| ·生物碱的药用价值 | 第20-22页 |
| ·印度蛇根木及其生物碱阿吗灵的药用研究背景 | 第22-23页 |
| ·阿马灵的生物合成途径 | 第23-27页 |
| ·生物碱合成途径研究与生物碱的制备 | 第27-28页 |
| ·萝卡辛糖苷酶(RG)的研究背景及立题依据 | 第28-37页 |
| 2 实验材料 | 第37-43页 |
| ·菌株 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·缓冲系统 | 第37-39页 |
| ·化学试剂及耗材 | 第39-40页 |
| ·生物试剂 | 第40页 |
| ·仪器 | 第40-42页 |
| ·结晶及晶体操作用具 | 第42-43页 |
| 3 实验方法 | 第43-63页 |
| ·化合物分析检测方法 | 第43页 |
| ·分子生物学方法 | 第43-49页 |
| ·蛋白质的纯化和分析 | 第49-56页 |
| ·结晶 | 第56-59页 |
| ·晶体X-射线衍射数据收集和处理 | 第59-61页 |
| ·序列分析软件及在线分析工具 | 第61-63页 |
| 4. 实验结果 | 第63-92页 |
| ·(His)_6-RG的异源表达及纯化 | 第63-64页 |
| ·氮端(His)_6标签的切除 | 第64-65页 |
| ·RG定点突变 | 第65页 |
| ·RG及其突变体对四种糖苷类生物碱的相对活力测试 | 第65-67页 |
| ·野生型RG及RG-W392A突变体对萝卡辛及异胡豆苷的催化动力学研究 | 第67页 |
| ·糖苷酶抑制剂对RG的抑制常数测定 | 第67-70页 |
| ·RG晶体的制备 | 第70-74页 |
| ·RG晶体复合物的制备 | 第74-78页 |
| ·冷冻条件下RG单晶衍射数据收集及结构解析 | 第78-80页 |
| ·室温条件下RG单晶衍射数据收集及结构解析 | 第80-83页 |
| ·三维结构模型的验证 | 第83-85页 |
| ·(His)_6-RG及(His)_6-RG-E186Q整体三维结构 | 第85-86页 |
| ·(His)_6-RG复合物和(His)_6-RG-E186Q复合物的三维结构 | 第86-89页 |
| ·基于结构的SG底物接受能力理性改造 | 第89-92页 |
| 5. 讨论 | 第92-120页 |
| ·RG催化的酶促反应及其重要意义 | 第92-93页 |
| ·RG与结构解析的植物GH1酶的比较 | 第93-99页 |
| ·RG的底物特异性分析 | 第99-105页 |
| ·RG的抑制剂研究 | 第105-110页 |
| ·冷冻与室温条件下收集RG数据比较 | 第110-116页 |
| ·甘油在寻找酶活性中心中的潜在应用价值 | 第116-117页 |
| ·SG的理性改造尝试 | 第117-118页 |
| ·蛋白质晶体制备方法讨论 | 第118-120页 |
| 6 结论 | 第120-121页 |
| 参考文献 | 第121-134页 |
| 文献综述 | 第134-159页 |
| ·结构生物学与底物接受能力 | 第136-139页 |
| ·结构生物学与酶底物拓展研究 | 第139-146页 |
| ·结构生物学与酶理性改造 | 第146-151页 |
| ·小结与展望 | 第151-154页 |
| 文献综述参考文献 | 第154-159页 |
| 附录 | 第159-161页 |
| 作者简历 | 第161-162页 |
