| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-26页 |
| ·大肠杆菌甲基转移酶 RlmM 与 RsmI 的简介 | 第15-19页 |
| ·大肠杆菌 23S rRNA C2498 甲基化酶 RlmM 简介 | 第16页 |
| ·大肠杆菌 16S rRNA C1402 甲基化酶 RsmI 简介 | 第16-19页 |
| ·蛋白的晶体学理论 | 第19-26页 |
| ·蛋白晶体学简介 | 第19页 |
| ·蛋白结晶原理及方法简介 | 第19-20页 |
| ·影响晶体形成的因素 | 第20-22页 |
| ·衍射数据的收集与处理 | 第22-23页 |
| ·蛋白的纯化方法 | 第23-25页 |
| ·本文研究目的及意义 | 第25-26页 |
| 第二章 rlmM 的克隆、表达及蛋白纯化 | 第26-42页 |
| ·实验材料 | 第26-27页 |
| ·菌株与质粒 | 第26页 |
| ·主要试剂及工具酶 | 第26-27页 |
| ·试验方法 | 第27-35页 |
| ·rlmM 基因的克隆及重组质粒的构建 | 第27-31页 |
| ·RlmM1-354的表达 | 第31页 |
| ·RlmM1-354的纯化 | 第31-35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-40页 |
| ·rlmM 基因 PCR 扩增产物电泳检测结果 | 第35页 |
| ·重组质粒 pET28at-plus- rlmM PCR 鉴定 | 第35-36页 |
| ·测序结果 | 第36页 |
| ·Ni 柱亲和层析纯化结果 | 第36-37页 |
| ·Heparin 离子交换层析结果 | 第37-39页 |
| ·Superdex200 凝胶过滤层析纯化结果 | 第39-40页 |
| ·本章小结 | 第40-42页 |
| 第三章 Rlm1-354的晶体筛选、优化以及 X-射线数据的收集及结构解析 | 第42-58页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-46页 |
| ·晶体的筛选 | 第43-44页 |
| ·衍射数据的收集 | 第44-45页 |
| ·数据的处理与蛋白模型构建 | 第45-46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-57页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第46页 |
| ·RlmM1-354、RlmM1-354与其底物 S-AdoMet（SAM）复合物晶体的初筛 | 第46-48页 |
| ·晶体的优化 | 第48-50页 |
| ·数据的收集 | 第50-51页 |
| ·数据的处理及结构分析 | 第51-57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 第四章 rsmI 的克隆、表达与蛋白纯化 | 第58-68页 |
| ·实验材料 | 第58页 |
| ·菌株与质粒 | 第58页 |
| ·主要试剂及工具酶 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-63页 |
| ·rsmI 的克隆 | 第58-60页 |
| ·pET21a -rsmI 的表达 | 第60-61页 |
| ·RsmI 的纯化 | 第61-63页 |
| ·RsmI 在溶液中聚集状态的确定 | 第63页 |
| ·结果与讨论 | 第63-67页 |
| ·rsmI 基因的克隆 | 第63-64页 |
| ·重组质粒 pET21a- rsmI PCR 鉴定 | 第64页 |
| ·测序结果 | 第64-65页 |
| ·RsmI 的 Ni 柱亲和层析纯化结果 | 第65-66页 |
| ·RsmI 分子筛 Superdex200 凝胶层析 | 第66-67页 |
| ·RsmI 在溶液中聚集状态的确定 | 第67页 |
| ·本章小结 | 第67-68页 |
| 第五章 RsmI 结晶条件的筛选与优化及初步 X-射线衍射分析 | 第68-75页 |
| ·实验材料 | 第68页 |
| ·实验方法 | 第68-69页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第68页 |
| ·RsmI 与复合物 RsmI-SAM 以及 RsmI-SAM-cytidin 结晶条件的初步筛选 | 第68页 |
| ·RsmI 与复合物 RsmI-SAM 以及 RsmI-SAM-cytidin 结晶条件的优化 | 第68-69页 |
| ·晶体的 X-射线衍射 | 第69页 |
| ·结果与讨论 | 第69-74页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第69页 |
| ·RsmI 与复合物 RsmI-SAM 以及 RsmI-SAM-cytidin 结晶条件的初步筛选 | 第69-72页 |
| ·RsmI 结晶条件的优化 | 第72-74页 |
| ·晶体的 X-射线衍射 | 第74-75页 |
| 第六章 结论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-80页 |
| 附录 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第83-84页 |
| 作者及导师简介 | 第84-85页 |
| 附件 | 第85-86页 |
