| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 目录 | 第11-16页 |
| 部分缩略词表 | 第16-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-30页 |
| ·真菌免疫调节蛋白（ FIPs）结构及功能 | 第18-19页 |
| ·真菌生长及蛋白表达的影响因素 | 第19-23页 |
| ·碳源和氮源 | 第19页 |
| ·pH | 第19-20页 |
| ·诱导剂 | 第20-23页 |
| ·甲基茉莉酸 | 第22-23页 |
| ·水杨酸 | 第23页 |
| ·真核基因表达调控的检测方法 | 第23-28页 |
| ·转录水平检测方法 | 第24-28页 |
| ·RT- PCR | 第24-25页 |
| ·实时荧光定量 P CR 技术 | 第25-26页 |
| ·Northernblotting | 第26-27页 |
| ·基因芯片 | 第27-28页 |
| ·翻译水平检测方法 | 第28页 |
| ·ELISA | 第28页 |
| ·Western blotting | 第28页 |
| ·黑灵芝及其研究现状 | 第28-30页 |
| 第二章 真菌免疫调节蛋白基因的克隆 | 第30-45页 |
| ·材料与方法 | 第30页 |
| ·材料与菌株 | 第30页 |
| ·试剂与培养基 | 第30-31页 |
| ·试剂盒 | 第30页 |
| ·相关试剂 | 第30-31页 |
| ·其他试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器和设备 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-37页 |
| ·真菌免疫调节蛋白基因克隆 | 第32-34页 |
| ·基因组 DN A 提取 | 第32-33页 |
| ·真菌免疫调节蛋白基因克隆 | 第33-34页 |
| ·克隆载体构建 | 第34-37页 |
| ·目的基因纯化 | 第34-35页 |
| ·目的基因与克隆载体连接 | 第35页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·转化大肠杆菌 DH5α感受态细胞 | 第36页 |
| ·菌落 PC R 检测 | 第36页 |
| ·测序 | 第36页 |
| ·黑灵芝 FIP 基因的生物信息学分析 | 第36-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-43页 |
| ·FIP-gas基因的克隆 | 第37-39页 |
| ·FIP-gas和其他 FIPs 的同源性分析 | 第39-40页 |
| ·FIP-gas的结构分析 | 第40-42页 |
| ·分子系统进化树 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 真菌免疫调节蛋白基因启动子的克隆、表达调控元件的预测和鉴定 | 第45-67页 |
| ·材料与试剂 | 第45-48页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·试剂 | 第45-47页 |
| ·试剂盒 | 第45-46页 |
| ·试剂 | 第46-47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·拟南芥培养土壤基质 | 第47页 |
| ·设备和仪器 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-59页 |
| ·真菌免疫调节蛋白基因启动子的克隆 | 第48-52页 |
| ·提取黑灵芝及赤芝基因组 DN A | 第48页 |
| ·黑芝及赤芝基因组 DN A 的酶切 | 第48-49页 |
| ·黑芝及赤芝基因组 D NA 酶切产物纯化 | 第49页 |
| ·黑芝及赤芝基因组 DN A 酶切产物连接至 Genome Walker 接头 | 第49-50页 |
| ·PCR 扩增 | 第50页 |
| ·胶回收 | 第50-51页 |
| ·目的基因片段与克隆载体连接 | 第51页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备制备方法参照 2.4.2.3 | 第51页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 DH5α感受态细胞转化方法参照 2.4.2.4 | 第51-52页 |
| ·菌落 PCR 检测 | 第52页 |
| ·测序 | 第52页 |
| ·启动子序列順式作用元件的预测 | 第52页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第52-56页 |
| ·引入酶切位点 | 第53-54页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第54页 |
| ·连接目的基因与克隆载体 | 第54页 |
| ·转化 DH5α感受态细胞 | 第54页 |
| ·菌落 PCR 检测 | 第54页 |
| ·质粒抽提 | 第54-55页 |
| ·质粒双酶切 | 第55页 |
| ·目的基因纯化 | 第55页 |
| ·目的基因与植物表达载体连接 | 第55-56页 |
| ·连接产物转入大肠杆菌 DH5α感受态细胞 | 第56页 |
| ·菌落 PCR 检测 | 第56页 |
| ·测序 | 第56页 |
| ·质粒抽提 | 第56页 |
| ·根癌农杆菌 EHA 05 感受态细胞的制备 | 第56-57页 |
| ·根癌农杆菌转化子的获得 | 第57页 |
| ·根癌农杆菌转化子的 PCR 检测 | 第57-58页 |
| ·浸花法转化拟南芥以及阳性转化苗的筛选 | 第58-59页 |
| ·浸花法转化拟南芥 | 第58页 |
| ·拟南芥阳性转化苗的筛选 | 第58-59页 |
| ·实验结果 | 第59-65页 |
| ·黑灵芝及赤芝真菌免疫调节蛋白基因启动子的克隆 | 第59-63页 |
| ·基因组 DNA 酶切 | 第59-60页 |
| ·真菌免疫调节蛋白基因启动子的克隆 | 第60-61页 |
| ·真菌免疫调节蛋白基因启动子序列分析 | 第61-63页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第63-64页 |
| ·转基因拟南芥阳性苗的筛选 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| 第四章 真菌免疫调节蛋白基因的诱导表达调控 | 第67-80页 |
| ·材料与试剂 | 第67-69页 |
| ·材料 | 第67页 |
| ·仪器 | 第67-68页 |
| ·试剂 | 第68页 |
| ·培养基 | 第68-69页 |
| ·实验方法 | 第69-74页 |
| ·菌种活化 | 第69页 |
| ·灵芝预培养 | 第69页 |
| ·制备生长曲线 | 第69-70页 |
| ·不同诱导因子诱导培养黑灵芝和赤芝的菌丝体 | 第70页 |
| ·菌丝收集 | 第70-71页 |
| ·转录水平检测 | 第71-74页 |
| ·提取 RNA | 第71-72页 |
| ·RNA 纯度与浓度检测 | 第72页 |
| ·灵芝总 RNA 反转成 cDNA | 第72-73页 |
| ·实时荧光定量 PCR | 第73-74页 |
| ·数据处理 | 第74页 |
| ·结果与分析 | 第74-79页 |
| ·生长曲线 | 第74页 |
| ·SA 和 MeJA 诱导后 RNA | 第74-75页 |
| ·FIP 表达分析 | 第75-79页 |
| ·MeJA 处理 | 第75-76页 |
| ·SA 处理 | 第76-78页 |
| ·pH 处理 | 第78-79页 |
| ·小结与讨论 | 第79-80页 |
| 第五章 总结和展望 | 第80-83页 |
| ·总结 | 第80-81页 |
| ·黑灵芝真菌免疫调节蛋白克隆及其生物信息学分析 | 第80页 |
| ·黑灵芝和赤芝 FIP 基因启动子克隆和分析 | 第80-81页 |
| ·真菌免疫调节蛋白基因表达调控研究 | 第81页 |
| ·创新点 | 第81页 |
| ·后续工作展望 | 第81-83页 |
| ·启动子活性的进一步分析 | 第81-82页 |
| ·环境因子对真菌免疫调节蛋白基因的影响 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-93页 |
| 附录 实验涉及的试剂和培养基配方 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文和申请的专利 | 第95页 |
